简介
酸洗脱法获取抗原多肽是指用一定强度的酸性缓冲液可将表位多肽和 β2M 从细胞表面洗脱下来，通过分离、纯化即可获得 Th 细胞表位多肽。
原理
酸洗脱法获取抗原多肽法的基本原理是指用一定强度的酸性缓冲液将表位多肽和 β2M 从细胞表面洗脱下来，通过分离、纯化即可获得 Th 细胞表位多肽。
材料与仪器
器材：
SepPak 柱、离心机、RP-HPLC 等。
试剂：
① pH3.0 的枸橼酸-磷酸钠缓冲液或 0.1% TFA；
② 10% TFA；
③ 60% 乙腈。
步骤
酸洗脱法获取抗原多肽法的基本过程可分为如下几步：
（1）收集细胞，用 pH3.0 的枸橼酸-磷酸钠缓冲液室温处理 1 分钟或用 0.1% TFA 室温处理细胞 30 分钟。4 ℃、15000 r/min 离心 20 分钟。收集上清，加入 10% TFA，重复离心。
（2）上清用 SepPak 柱吸附、浓缩后，用 60% 乙腈进行洗脱，收集洗脱液。冷冻干燥后，- 70 ℃ 保存、备用。
（3）用含 0.1% TFA 的水溶解多肽，采用 RP-HPLC 进行分离，分步收集各多肽片段，冷冻干燥后 - 70 ℃ 保存、备用。
来源：丁香实验
