组织TNF-a表达用什么方法看

在做大鼠神经组织（背根神经节）TNF-alpha的ELISA，用的是R&D的盒子，做了三四次了，标准品的吸光度很稳定，但是样品就是出不来

求各位大佬帮忙分析：

1. 组织提取：100mg组织加100ul含蛋白酶抑制剂PBS，匀浆至无组织碎片。12000g 4度离心10min取上清。BCA定量800-1000ug/ml。

2. 样品稀释和ELISA操作严格按照说明书（如图）

3.孔加样：板条剪开，2-3个蛋白样品（稀释液➕蛋白溶液）一个空白对照（稀释液➕提蛋白用的含酶抑制剂PBS），一个阳性对照（标准品母液稀释到50pg/ml）

结果就是每次阳性对照有吸光度，做过两次标曲梯度也没问题， 样品就是和空白没什么差别……

求助大家：

1. 有没有大佬做过神经组织TNF-a的ELISA，是表达量本来就很低还是我的操作有问题嘞？

2. 组织TNF-a表达用什么方法看嘞