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科研学霸天团,48小时有问必答
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目的蛋白趋势是什么意思?什么是内参齐?
bamboopiggy
目的蛋白的趋势,比如说你的对照组比你的实验组的蛋白表达量少50%,但是你每次做wb,不可能是做的结果一摸一样,可能这次少50%,下次少40%,只要有少的这个趋势就可以。内参,因为wb是半定量的,需要一个同样样品中的,不容易改变的蛋白,作为上样量的参考,一般都是选的管家基因:如:actin,gapdh等。
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问
取小鼠肿瘤组织制备单细胞悬液进行细胞比例测定,必须用新鲜组织吗,能不能用存放的组织?
天一湖医者
细胞比例测定建议最好用新鲜组织。
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问
可以用S/P20细胞注射小鼠,待小鼠长瘤子之后去瘤细胞吗?如何可以,请问是皮下注射还是腹腔注射?如何去取这个瘤细胞呢?
天一湖医者
可以用S/P20细胞注射小鼠,待小鼠长瘤子之后去瘤细胞。可以选择皮下注射。
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问
怎么确定做多色流式的时候补偿调的合适?只要横平竖直就可以了吗?
天一湖医者
每个荧光素必须要有单染管,也就是只染该荧光素的样本;单染管必须要有阳性群和阴性群,来比较它们之间的平均荧光强度,没有阳性群或阳性群不明显时,可以用商品化微球代替;用于调补偿的抗体必须和实验用的抗体一样,货号不同需要重新调补偿;阴性和阳性细胞的自发荧光水平要一致。
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问
macs分选的免疫细胞,因为使用了部分表面抗体,后续的激活实验会有很大影响吗?
天一湖医者
是否有影响,取决于几个因素:后续实验和分选的间隔时间。分选时所选用的抗原。分选时所选用的荧光素和后续实验的荧光素的种。
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问
巨噬细胞Raw264.7培养以及极化问题
荒诞小说
我养raw都是用的DMEM高糖培养基+BI血清。细胞刮传代,传代时轻柔吹打,因为机械刺激也会诱导raw分化。M0的raw是透亮的圆形,分化的raw会变形长角,同时贴壁会变牢固,不易传代。
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问
用于作为抗原对小鼠免疫的带His标签的目的蛋白有必要用Ni柱进行纯化吗?不纯化直接用来免疫可以吗?
天一湖医者
用于作为抗原对小鼠免疫的带His标签的目的蛋白是有必要用Ni柱进行纯化的。建议纯化后再用于ELISA.否则可能会产生很多非特异性的信号和比较高的背景.
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问
请问跑出这样的条带是怎么回事?
Keven轩
有些不太整齐,应该是配胶没有均匀吧
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问
流式细胞术如何进行荧光补偿?
天一湖医者
使用标准微珠确保细胞仪的性能符合规格。 利用未染色的样品设置荧光通道电压。调节前向和侧向散射光,以便清楚界定细胞群。在后续分析中,死细胞、细胞团以及细胞碎片应被排除。应尽可能避免使用发射光谱重叠程度较高的某些荧光染料组合(例如,APC 和 PE-Cy5)。各荧光染料都需要补偿对照,并且应包含阳性和阴性细胞群。设置补偿时应单独使用补偿对照。 阳性细胞群的亮度应至少与实验中包含的其他细胞的亮度相当,并
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问
Percoll 密度梯度分离法中 Percoll 渗透压低,黏度小,形成的梯度非常稳定,最高可达多少密度?
bamboopiggy
这个要根据你的实验目的来判断啊,一般做细胞我最高用过70%的,密度1096.8g/l
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问
应该怎么去挑选细胞接种数?
bamboopiggy
首先看参考文献,然后根据你的经验,挑一个中间值
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问
请问流式细胞学技术中如何选择适合的荧光染料?
天一湖医者
1)确定荧光染料本身所适合的流式干细胞仪,需要了解染料的激发波长和发射波长、仪器所配制的检测滤光片和激发光源。(2)了解荧光素的相对荧光强度:相对荧光强度反映的是荧光素-单抗结合物的亮度,其判断标准是染色指数。影响相对荧光强度的因素包括:不同仪器的激光及滤片组合不同,荧光素的相对荧光强度不同;抗体上荧光素分子的多少会影响相对的荧光强度。(3)选择原则:考虑抗原的密度【高密度表达的抗原可考虑选择几乎
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问
wb条带求助 分子量在95kd,转膜200mA 90min pvdf膜,跑不出目的条带,内参是好的
天一湖医者
抗体的选择是否有问题,有没有阳性对照?
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问
变性时上样缓冲液加少了,有影响吗
bamboopiggy
再补点进去,就好,问题不大。实在不放心就重新变性一下
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问
分别收集EGF刺激0分钟、5、10、30分钟的1841乳腺癌细胞,提取蛋白质,分别进行酶解,然后采用iTEAQ中的不同核素标记。
bamboopiggy
EGF刺激0分钟、5、10、30分钟的1841乳腺癌细胞中,不同时间点酪氨酸磷酸化位点的变化
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问
有什么方法能区分凋亡,坏死,焦亡吗?
bamboopiggy
分别加入凋亡,坏死和焦亡的抑制剂,看那个能rescue你的细胞,你的细胞就是哪种死亡方式。
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问
固相免疫分析时,捕获蛋白的免疫分析的亲和力可以通过哪种方式增加,怎么增加实验中蛋白的结合率?
bamboopiggy
找到合适的ph值,找到合适的蛋白浓度,做好预实验,
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问
请教一下这个免疫荧光图,这里的白色箭头指的是什么呢
bamboopiggy
你看figure legend,第一行的箭头代表 AQP5,第二行代表prospc,第三行代表 vWF 比较经典的位置。
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问
固相抗体是怎么形成的?
bamboopiggy
将抗体连接在固相载体上,形成固相抗体。其实就是按你抗体的载体是什么
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问
elisa结合活性实验中 酶标仪测出来的吸光度总是两边高 中间低是什么原因呢?
bamboopiggy
首先确定酶标仪没有问题,其次看你操作过程中,是不是对中间冲的比较厉害?
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