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科研学霸天团，48小时有问必答

问没有用盐酸分化有什么影响啊？

diudiu2006

盐酸分化只是将残留在胞质中苏木精洗掉，使胞质胞核的界限更加明显。与DAB上色没有关系。怀疑你的DAB显色没有成功。

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问免疫组化一抗的选择要点和技巧是什么？

xtt123

要点：一抗二抗都是一种可以特异结合别的东西的基团，而且一抗可以至少结合两种其他基团（底物和二抗）

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问组织切片做免疫荧光，背景色太重怎么办？

shy890726

背景色成因分两方面一、组织切片因染色过程或组织非特异荧光而出现的背景色二、拍照时因硬件设施或取景器设置而出现的背景色。针对第一种问题有以下几点建议：1. 采用高品质的多聚甲醛固定减少普通甲醛的自发萤光 2. 切片厚度减薄 3. 切片贴片后流水冲洗干净减少杂质荧光 4. 一抗以及二抗漂洗干净！（非常重要） 5. 选用高品质封片介质。针对第二种问题有以下几点建议：1. 曝光时间的控制 2. 暗室操

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问脱片产生的原因是什么？如何防止脱片？

口贝力15206

由于免疫组化过程长，组织切片长时间浸泡在缓冲液和试剂内经过多次冲洗浸泡和作用，尤其是在抗原修复过程中，由于高温、高压、辐射等因素的影响，极易造成脱片

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问免疫组化结果与文献相反是为什么？

yqc127

这可能要从两方面考虑：1. 自己的主观原因，可能是自己实验操作的问题；如果自己的问题感觉不大，也可能是抗体特异性的问题，可以看看有没有相关的文献也用了类似的抗体，进而一步步查找问题。2.标本的客观问题，由于不知道有没有可能你的标本是一个有别于文献报道的特例？还是文献报道的情况是有限制范围的？这要自己斟酌。即使是同一样本，由于存在取材，保存，处理等多方面的差异也可能导致最终的结果的不同。

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问有人做过免疫组化，一抗用NF-KB么？求阳性结果图。

伊一1

可以查文献找图，有的公司网站上有对应抗体的图，还有就是找阳性对照组织做，最后建议你弄个阴性对照，就是用PBS代替一抗，这样更利于对比

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问细胞及组织标本的要求有什么？

鱼doctor

4%的多聚甲醛固定，不需要无菌，组织块大小最好是undefinedundefined0.15cm

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问免疫组化一般如何设置对照组？

我是金博士

原则上讲，所有实验都应该设置阳性对照（用以检验染色过程成功），阴性对照（用以检验阳性结果为真阳性），空白对照（用以排除非特异背景染色）。不过，由于样本选取的复杂性，国内多数实验室以及国外多数小实验室，都无法做到规范的阴性对照，所以普遍以空白对照代替阴性对照，而这种方法也在国内外得到承认。

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问标准曲线怎么做不好?

冬天的棒棒糖

最好用排枪同时加显色液，样品浓度太高，都饱和了

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问为什么本应该是核阳却结果都是浆阳？

alaling

1. 请病理科大夫确认是否为假阳性。这个是非常关键的一步2. 如果确认为真阳性，那么请确认你的抗体是正确的抗体3. 如果上面两步没有问题，请相信自己的结果！可能别人的做法是做的其它组织的或正常肺组织而不是肺癌，不同组织表达位置不同；也有可能实际情况确实如此，再找原因进行分析！不要试图改变正确的结果附会其它人的结果，这样往往会导致真相被掩盖！

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问请问出现散乱不规则分布的原因是什么？

远古的早晨

多孔板可能好一些

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问小鼠脑部组织切片用什么方式比较好？

新天夏

如果是免疫荧光的话建议冰冻切片，如果是普通免疫组化使用石蜡切片更好。并建议在上述站友的基础上，在30%蔗糖脱水前使用20%蔗糖脱水一次，效果更好，待样品沉底，可以换30%蔗糖

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问大鼠脑组织的免疫组化，片子出现团块是什么原因？

handeping

以前做脑组织HE染色时就发现会出现均质红染的纤维样团块，团块数量每只鼠不一样，分布位置主要在白质，有的团块很大，有的较小。当时不是自己的试验，所以没有太关注为什么会有这些变化。所以推测你组化阳性染色的地方也可能是这些地方，会不会是非特异性染色。

3 回答2151 围观

问4% 多聚甲醛灌流固定，不是0.1M PBS 配的，冰冻切片，漂染，发现片子易碎为什么？

hh54ll

那个组织的切片，固定时间多长，固定完成后用的什么处理的。问的太笼统了！

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问ELISA 酶联免疫吸附实验步骤一、四中的抗体是同一个吗？

xinqingruyu

步骤四是洗涤步骤，没有抗体，步骤五有抗体。步骤一的抗体和步骤四的抗体，可以是同一种抗体，也可以是不同种抗体，这样根据具体实验而确定，但是这两种抗体又是有区别的，步骤一的抗体作用是一端吸附于酶标孔，一端吸附待检物质，步骤五是被标记物（如HRP）标记的抗体，作用是放大前面步骤的反应效果，便于测试。

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问有时片子上的组织有裂纹，是脱水时间太长的缘故吗？

akitten

有可能也有可能是二甲苯透明时间过长拿出后封片速度较慢片子在空气中已干燥的话就会容易有裂纹出来

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问细胞膜做免疫荧光要用什么特异性抗体

长颈鹿叔叔

一抗标记IF的。IHC-P的意思是石蜡切片免疫组化技术，一般情况下石蜡能做的，冰冻也能做，你组织切的是什么就不能选择什么来源的，比如大鼠组织切片，一抗来源就需要选择兔或者是小鼠，二抗是根据一抗来源选择的，一抗是兔的就选XX抗兔，一抗是小鼠的二抗就选XX抗小鼠。

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问在各个序列相上呈现什么样的密度可以考虑为脊髓瘤呢？

我是金博士

1、脊索瘤的诊断特征：有不规则肿块，形态欠规整。在T1 加权图像上呈低信号，在T2加权图像上呈不均匀高信号。2、脊索瘤可以与鼻咽癌、脑膜瘤、颅咽管瘤以及软骨瘤鉴别。鼻咽癌起源于咽隐窝，信号强度较均匀，很少有钙化，有显著异常对比增强。颅中窝底脑膜瘤很少引起邻近骨的广泛破坏，T2WI 图像呈等信号甚至低信号，具有十分明显的异常对比增强。颅咽管瘤在T1WI 与T2WI 图像信号强度变化幅度大，增强较少见

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问免疫组化结果如何分析？

买买提奥

（1）阳性着色细胞计数法。在4undefined光镜下，随机选择不重叠的10个视野，人工或机器计数阳性着色细胞，每组3~6张不同动物组织切片，然后进行组间比较即可。（2）灰密度分析法。通过在不同组别和不同动物组织切片上选择相同区域、相同条件下用image j进行灰密度分析，然后进行统计分析即可。（3）评分法。通过在光学显微镜下对组织切片分别按染色程度（0~3分为阴性着色、淡黄色、浅褐色、深褐色）、阳性范围进行评

1 回答3543 围观

问腹膜纤维化掉片严重怎么办？

laiyimei

你可以试试用水浴锅来做抗原修复，掉片会有很大的改善！

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