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科研学霸天团,48小时有问必答
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求助,Hif1a的ChIP
天雨心晴
缺氧箱也可以,只要能诱导出低氧应答就行。
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问
小胶质细胞标志物的免疫荧光染色染不出来怎末改进?
Injector2016
Iba1很容易染出来的,不会是二抗有问题吧,或者成像设置有问题?
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问
免疫荧光定抗体GABA
小小小小小芳
可以、细胞免疫荧光想染GABA,买抗体买Anti-ABAT/GABA-T是可以的哟
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问
有人用间接竞争法做过化学发光酶免疫分析吗?
精准检验每一天
最主要的是要清洗干净,每一步都做好冲洗,才能保证结果的正确性!
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去除刺激源后的m2巨噬细胞稳定吗
小小小小小芳
可以参考文献1. JoVE. June 2013 2. Sci Rep. 2020THP-1细胞向M1,M2的极化
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问
组织放多久还可以做流式
WolfgangX7YL
要分活细胞的话最好立马做吧,冻了-20或者-80或者液氮都影响蛮大的,原则就是尽快做,在做之前都放在4度
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问
求助:包装腺相关病毒
Dr_劉医生
不是必须的,可以用HEK293;先是用常规的方法培养HEK293细胞,传代后24 h后,用购买的Lpotectamin 2000协助重构的质pAAV—MCS及AAV HelpeFreesystem中的其他两种辅助质粒pAAV—RC及pHelper共转染HEK293细胞,培养72 h后,用X—gal染色系统检测质粒转染的效果。用物理方法破碎细胞后,提取病毒悬液,用分光光度仪检测260nm的A值来评价
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问
跪求幽门螺杆菌SS1菌株及培养技巧
Dr_劉医生
1. 先将适应菌株SS1和初始菌株10700菌株接种于含50mL/L绵羊全血的哥伦比亚琼脂平板上, 平板中含有两性霉素B 200 mg/L、多黏菌素B 200 mg/L、万古霉素250 mg/L、TMP 300 mg/L. 2. 平板置于50 mL/L O2, 100 mL/L CO2, 850 mL/L N2的微需氧气体环境中37℃培养48 h后3. 取出平板后刮取菌苔, 用8.5g/L的NaC
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死活染颜色的固定了之后可以保存多久
小小小小小芳
如果不能及时上机检测,可将已经染色的细胞在1-4%的多聚甲醛中4℃固定30min,清洗细胞,之后用适量的Stain Buffer重悬细胞,4℃避光保存。固定的细胞需要尽快上机检测一般不应超过72h。前面已经做过类似固定步骤(例如固定破膜)的细胞如果能确保24h内上机,实际上无需再次固定。如不能,推荐再次固定以稳定胞内抗体的结合。
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LDH释放实验中的HLA分子抑制剂选择
你好几和户
可以选下面这些的Sodium oxamate,AZ-33,GSK 2837808A
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做免疫荧光一抗是标签抗体,非特异性太多怎么办
冷泉港蛋白
1.如果用的是His标签抗体,特异性是比较差的,想调整的话,难度比较大,抗体本身特异性不好。因为是undefinedhis。undefinedhis、undefinedhis可能都会反应。2.如果用的是Flag标签抗体,挺好用的。可以调整下浓度和洗脱液。如果不行,换个进口抗体试试。
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同等条件下免疫荧光染色为何有组织无荧光或荧光差异?
Eason老歌迷
虽然是一起做的,但染色过程不是同时进行,还是有差异的吧,可能有的样本染上色了,有的就没有染上色。
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免疫组化的一抗一般可以重复使用几次?
LuoYinli07
4度过夜的话,一般1-3次。不建议回收,这个每张片也用不多少抗体。时间宝贵。
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怎样包毛囊才能更好的切到毛囊的纵切?有什么切组织和包埋的技巧吗?
Dr_劉医生
建议用冰冻切片优先,切片前最好先用蔗糖溶液浸泡,以防止冰晶的产生,而且降温的速度宜快,能使标本的温度与低温箱的温度相同(标本温度过热切片组织易被挤压,组织结构重叠;温度太低时,切片组织易脆裂)。此外,切片时先将样品台上的OCT修出平台,放置毛囊时应注意使毛囊球部朝向刀口,这样才有利于获得纵剖面。速度不能过快,不然容易厚度不均匀,而且毛干和组织鞘分离,破坏结构。
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免疫荧光切片是否可以用流式抗体染色?
Eason老歌迷
流式抗体比较容易淬灭。做免疫荧光的话,在同等条件下,当然选择做荧光抗体啦,但实在没有,流式抗体还是可以用的,不过最好马上去荧光显微镜下看结果,时间长了不是很好。我用过流式抗体做荧光染色,效果还可以。
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流式细胞仪胞内因子染色
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多重免疫荧光出现通道串色的情况,如何降低串色跟非特异性荧光着色!
陈皮712
1. 选择波长差异较大的染料;2. 在仪器上调好校正,或者在流式相关软件上进行调整(如flowjo的校正矩阵);3.关于非特异性着色,首先细胞跟抗体孵育后,充分用PBS清洗,并选择着色特异性较好的抗体品牌,必要时染完一种色后进行封闭处理。
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有淋巴细胞做抗原实验
小小小小小芳
可以参考文献Guidelines for the survival bleeding of mice and rats.(2010).
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多糖的免疫调节活性,有几点问题?
Eason老歌迷
你就可以参看这篇文献,这个综述讲的很详细。“分子修饰对多糖免疫活性影响的研究进展”分享给你。
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石蜡包埋,蜡块出现裂纹
Eason老歌迷
可能是你的蜡的韧性不好。你可以加少量的蜜蜡;或者将一般石蜡反复融解、凝固,直到蜡由白色变成微黄色为止。处理好的蜡有韧性,在漂片时可以抻得很舒展,那些微小的皱褶几乎都能打开。
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