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多重免疫荧光出现通道串色的情况,如何降低串色跟非特异性荧光着色!

相关实验:免疫荧光技术

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向日葵需要大太阳

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5 个回答

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Eason老歌迷

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要是有串色,你可以尽可能选择无光谱交叉的荧光素。或者是荧光强度太高,也有可能导致光谱交叉的问题出现,可适当的降低抗体浓度、孵育时间等方法解决。可以使用序列扫描的方法拍摄:这个根据具体的显微设备做调整。或者是改变激发光波长强度:可以通过降低激发光的强度、减少光电倍增管效能等方法。

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陈皮712

有帮助

1. 选择波长差异较大的染料;2. 在仪器上调好校正,或者在流式相关软件上进行调整(如flowjo的校正矩阵);3.关于非特异性着色,首先细胞跟抗体孵育后,充分用PBS清洗,并选择着色特异性较好的抗体品牌,必要时染完一种色后进行封闭处理。

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向日葵需要大太阳user-title

染四个通道,总有一个通道相对比较接近怎么办

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陈皮712

我做过5个指标的,可以尝试两两指标地做。例如A—PE+B—FITC,C—PE+D—FITC,E在单独做。然后再各种做一个校正管和同型对照。ABCDE其实只做单色也可以,连校正都省去了。不过这样做的缺点是不能得到准确的比例,只能有一个区间。如果一定要4个指标一起做,也不是不可以,染料那么多,配色配好就行,有些抗体品牌是配色手册的,或者可以咨询抗体公司的技术员,让他根据你仪器的型号给你配色。

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Injector2016

有帮助

1.成像的时候缩小激发光的波长范围

2.减少二抗浓度和染色时间,可以试试1:2000室温半小时

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balalaLy

有帮助

避免非特异性染色一是要封闭,二是一抗种属最好选择跟标本不同来源的。多重荧光串色一方面是机子硬件的调配,二是选择二抗的时候尽量选择不同波长且间距比较大的。

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whilt-shirt

有帮助

这种情况可以试试降低抗体浓度。

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