hrzdzz
求助,想证明某药物通过泛素-蛋白酶体调控蛋白降解,想知道该药物和mg132联合用药的方案,是二者同时作用于细胞还是有先后顺序以及加药的作用时间,求大神解答
loveliufudan
如果您想证明某药物通过泛素-蛋白酶体途径调控蛋白降解,您可以通过联合使用该药物和mg132等蛋白酶抑制剂,来验证该药物是否能够被蛋白酶体途径调控。一般来说,药物和蛋白酶抑制剂可以同时作用于细胞,或者先加入蛋白酶抑制剂,然后再加入药物,这可能取决于具体的实验条件和您的研究需求。
以下是一种可能的联合用药方案:
在细胞培养基中加入适量的mg132等蛋白酶抑制剂,用于抑制泛素-蛋白酶体途径的蛋白降解。
在一定时间后加入您要测试的药物,观察药物是否能够促进或抑制目标蛋白的降解。时间的选择可以根据您的实验条件和研究需求来确定。
对细胞进行蛋白质提取和Western blot等实验,检测目标蛋白的降解程度。通过比较联合用药组和单独用药组的实验结果,可以判断该药物是否调控目标蛋白的降解。
需要注意的是,具体的实验方案可能会因药物性质、细胞类型、实验条件等因素而异,因此建议您根据具体情况来选择合适的实验方案。此外,需要对每一步实验操作进行严格的控制,并进行对照组的设计,以确保实验结果的可靠性。
土井挞克树
可以设计预实验来验证,比如设计A组是二者同时作用于细胞,B组是先后顺序作用于细胞,然后摸索加药的作用时间来探讨实验的设计方向
balalaLy
先加药后加MG132,MG132一般是实验结束前5h左右加