泛素化条带没有出现拖带现象，而是出现了几个明显的单独的条带，请问一下是什么原因呢？
dxy_rhq25h95
想要检测A蛋白的泛素化情况，大致实验流程如下：收集细胞前用MG132（10μM）处理细胞6h，提取蛋白，进行IP实验，用抗A蛋白抗体进行IP，将A蛋白拉取下来之后，得到的IP蛋白样本进行WB实验，一抗使用的是华安的anti-ubiquitin单克隆抗体（货号ET1609-21），结果得到的条带没有像文献中那样有拖尾的条带，而是出现了几条明显的单独的条带，不知道是什么原因，想请教一下各位老师，帮忙分析一下，谢谢！
5 个回答
dxy_e30rps3r
请问有解决吗？我也出现相同情况，input组ub发光也是正常的，ip组就是有单独条带
长成七朵太阳花
您好，请问您的问题解决了吗？也遇到了同样的问题
dxyc42u
像是操作的问题，再试一次看看。
dxy_rhq25h95
请问具体是哪一操作步骤可能出现了问题呢？
loveliufudan
这种情况可能是由多种原因导致的。
1.抗体问题：抗体可能不具有足够的特异性和敏感性，或者是不适合这种特定的实验。
2.样本问题：样本可能不包含足够的泛素化的A蛋白，或者泛素化的A蛋白可能不稳定。
3.试剂问题：试剂可能出现了问题，如过期或不足，导致结果不准确。
4.实验问题：实验过程中可能有手误或其他技术问题，导致结果不准确。
建议对比文献中正确的结果，并重复实验，同时对实验过程进行详细的审核和检查，以确定原因并解决问题。
dxy_rhq25h95
谢谢您的回答。我的input组可以做出正常的ladder泛素化条带，抗体应该是没有问题的，请问一下还可能是什么原因导致的呢？这是我的input组用相同的抗-ubiquitin抗体做的wb。
土井挞克树
考虑体系中还是存在降解，才会有多个单独条带
dxy_rhq25h95
我的input组结果是正常的，您是说在IP过程中，蛋白样品发生了降解吗？蛋白提取中，已经在裂解液里加了蛋白酶抑制剂混合物，那么怎样可以最大程度上避免降解呢？
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