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泛素化条带没有出现拖带现象,而是出现了几个明显的单独的条带,请问一下是什么原因呢?

相关实验:蛋白质泛素化分析

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dxy_rhq25h95

想要检测A蛋白的泛素化情况,大致实验流程如下:收集细胞前用MG132(10μM)处理细胞6h,提取蛋白,进行IP实验,用抗A蛋白抗体进行IP,将A蛋白拉取下来之后,得到的IP蛋白样本进行WB实验,一抗使用的是华安的anti-ubiquitin单克隆抗体(货号ET1609-21),结果得到的条带没有像文献中那样有拖尾的条带,而是出现了几条明显的单独的条带,不知道是什么原因,想请教一下各位老师,帮忙分析一下,谢谢!

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5 个回答

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dxy_e30rps3r

有帮助

请问有解决吗?我也出现相同情况,input组ub发光也是正常的,ip组就是有单独条带

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长成七朵太阳花

有帮助

您好,请问您的问题解决了吗?也遇到了同样的问题

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dxyc42u

有帮助

像是操作的问题,再试一次看看。

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dxy_rhq25h95user-title

请问具体是哪一操作步骤可能出现了问题呢?

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loveliufudan

有帮助

这种情况可能是由多种原因导致的。

1.抗体问题:抗体可能不具有足够的特异性和敏感性,或者是不适合这种特定的实验。

2.样本问题:样本可能不包含足够的泛素化的A蛋白,或者泛素化的A蛋白可能不稳定。

3.试剂问题:试剂可能出现了问题,如过期或不足,导致结果不准确。

4.实验问题:实验过程中可能有手误或其他技术问题,导致结果不准确。

建议对比文献中正确的结果,并重复实验,同时对实验过程进行详细的审核和检查,以确定原因并解决问题。

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dxy_rhq25h95user-title

谢谢您的回答。我的input组可以做出正常的ladder泛素化条带,抗体应该是没有问题的,请问一下还可能是什么原因导致的呢?这是我的input组用相同的抗-ubiquitin抗体做的wb。



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毛利小五郎的徒弟

有帮助

考虑体系中还是存在降解,才会有多个单独条带

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dxy_rhq25h95user-title

我的input组结果是正常的,您是说在IP过程中,蛋白样品发生了降解吗?蛋白提取中,已经在裂解液里加了蛋白酶抑制剂混合物,那么怎样可以最大程度上避免降解呢?

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