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蛋白质点杂交求助!

相关实验:蛋白质的分离纯化

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梅菜crow

最近在试蛋白质点杂交的实验,总是不成功

这是最近的一次结果 很奇怪

周围感觉有蛋白 但是孔里就是没有这究竟是为啥

有小伙伴可以分享一下protocol或者经验吗?

比如 裂解液类型,样品浓度,NC膜使用方法之类的

非常感谢大家了!!!!

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1 个回答

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毛利小五郎的徒弟

有帮助

我解答一下你关于NC膜的疑问:选择硝纤NC膜时要注意的是选择合适的孔径,通常20KD以上的大分子蛋白用0.45um孔径的膜,小于20KD的话建议选择0.2um的,如果小于7KD的话选择0.1um的膜。另外还要注意选择纯的NC膜。混有含醋酸纤维(CM)的NC膜结合力会有所降低。
另外,由于NC膜上结合的蛋白会因为一些去污剂而被代替,因此在封闭时使用较温和的Tween20,而且浓度不要超过0.3%(据说0.05%效果)。一般而言,NC膜越纯,其蛋白结合能力就越高,所以要增加WB的灵敏度和分辨率,提高所使用膜的纯度是个可以考虑的选择。如果NC膜搀杂一些醋化纤维素,会影响蛋白质结合。ADVANTEC生产的硝酸纤维素滤膜由于是纯NC膜,比较脆,需要小心操作。

注意事项:
1.由于硝酸纤维素膜是亲水膜,故不需要在乙醇、甲醇等溶液中浸泡活化。
2.硝酸纤维素膜比较脆,容易破碎,操作要小心。
3.本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
4.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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