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DNA点杂交

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DNA斑点印迹的制备 预备1.冰浴中以70W左右的超声波处理基因组DNA 1min,用琼脂 糖凝胶电泳检测片段大小,这些片段大小均应为7~10kb。2.用TE缓冲液将DNA稀释至0.5μg/μl。 斑点印迹的制备1.加热5μg DNA(在10μl TE缓冲液中)至95℃ 10min,冰浴5min。用微量离心管短暂离心收集液滴,置冰浴。2.裁一张大小合适的滤膜,用铅笔在滤膜上画1cm的方格网以标记DNA点样的位置。3.滤膜先用蒸馏水稍微浸湿,并用20×SSC使其饱和。将膜放在经20×SSC预饱和过的滤纸(Whatman 3MM)上。4.以5μl的DNA分装样品在滤膜上点样,待前一个样品干燥后再点第二个样品。5.将滤膜放在一张干燥的滤纸(Whatman 3MM)上稍微晾干,以5×SSC漂洗5min。6.将DNA固定于膜上,硝酸纤维素膜需置80℃真空烤炉2h。当尼龙膜仍潮湿时,应用Saran包装膜(或任何类似的塑料薄膜)包裹,将DNA面朝下置紫外透射仪上,紫外线(280mn)照射3~5min,这时的滤膜已可用于杂交。
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