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科研学霸天团,48小时有问必答
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WB背景有竖纹,该如何解决
Eason老歌迷
想问一下,你是1.0的板还是1.5的板,厚胶容易发生。还有你这是条带笑脸,说明凝胶不均匀冷却,或者是电泳系统温度偏高。
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问
受体和通路的关系
Eason老歌迷
我举个例子吧,同一神经递质,在神经系统的不同部位会表现出不同的兴奋和抑制效应。只要是突触后膜上受体类型不同。受体不同,通路的效应也不同
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诱导过程中,菌体碎屑
Eason老歌迷
你有没有在超净台上操作,是不是有杂菌。然后可能是噬菌体感染。
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问
WB显影
balalaLy
wb是一门玄学,做得越多越能碰上各种奇奇怪怪的情况。有些情况你也解释不清楚,重复做就是了,实在不行换个抗体,还不行,咱换人做。
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问
求问各位WB大神
balalaLy
转膜转够3小时吧,转膜液中甲醇的浓度可以调低点
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问
WB条带跑不好
balalaLy
上样体积有点大,loading buffer不能把蛋白压缩,换一种或者往buffer中加一点巯基乙醇。
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问
LC3B一条带不清晰。
balalaLy
电泳可以再往下跑,差不多把溴芬兰跑出去,转膜时间再延长一下。
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问
小胶质细胞
天一湖医者
这个目前个人觉得最有效的分离方法,目标:小胶质细胞(microglia)材料:长到已经融合的小鼠脑胶质细胞混和培养(mixed glial culture)Trypsin-EDTA solution (2.5% trypsin, 1 mM EDTA in HBSS; 25200-072)Dulbecco’s modified Eagle medium-F-12 nutrient mixture (
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问
假如我顺利取下了小鼠脑袋,我要怎么做用于后续的wb、pcr,免疫组化免疫荧光,
balalaLy
脑袋那么大,要取你需要的部位,wb,pcr的组织量只需要米粒大小就够了,分开保存到-80或液氮,组化和荧光的放固定液中
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问
用Elisa检测细胞上清中的IL-6,请问为什么得到的浓度是负数,就算没有也应该是0啊
balalaLy
蛋白量很低的情况下灵敏度是会降低的。有没有做标准曲线,是不是在可检测范围。
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问
western blot 内参相关问题?
balalaLy
内参抗体一般很少出问题,使用次数多或者抗体稀释液不好会容易出杂带。用5%bsa in tbst 稀释或者用商品化的抗体稀释液。
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问
关于WB实验跑带问题?
天一湖医者
问题出在每一步都有一定的可能性,比如电泳,转膜,敷抗体,显色等等
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问
wb只在顶端有结果
balalaLy
有没有可能是抗体失效了,上面那个只是杂带
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问
蛋白筛选
Eason老歌迷
wnt信号通路是一个复杂的蛋白质作用网络。wnt配体可与卷曲蛋白相互作用,导致各种细胞内信号传导级联激活,这些信号传导级联又可以交叉连接或独立发挥作用,调节多种多样的生化过程。wnt3a是wnt/β-catenin经典途径中的主要配体。当存在wnt3a配体时,其会与细胞膜上的受体fzd结合激活wnt信号通路,导致β-catenin去磷酸化,使得β-catenin在细胞质中富集并转移至细胞核内,与t
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问
蛋白不是花就是拧,每次都是那个地方不好,请问是转膜的问题还是胶或者膜有问题呢
秋秋欣欣
每次都是这样的话估计是你的蛋白有问题了
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问
wb黑糊糊一片,是怎么回事呀?湿转,300mA 100min,分子量110kD左右。
秋秋欣欣
除了封闭外,发光液配置时间过长同样会引起发光效果不好,背景脏或者漆黑一片。
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问
磷酸化蛋白免疫印记实验
天雨心晴
时间长点,一般问题不大,主要是抗体的浓度和特异性可能存在问题。
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问
慢病毒包装完,其基因组是一条单链RNA吗?是慢病毒质粒上的5' LTR到3'LTR吗??
Eason老歌迷
包装好的病毒只含有结构质粒5'LTR和3'LTR之间的RNA序列。包装蛋白的RNA是不进入包装完成的病毒的。
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问
表达蛋白发现偶尔在上清偶尔在沉淀,这个问题怎么解决,这几次纯化的效果都不好?
朵儿小可爱
建议如果用镍柱来纯化蛋白的时候,纯化的过程纯化之后的溶液当中适当的加一点EDTA,让它螯合脱落下来的镍离子,减少重金属对蛋白的伤害
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问
请问有时候WB结果呈现以下这种条带,可能是什么原因呢?
朵儿小可爱
胶体中存在气泡,或不溶性杂质,胶不均不平整。
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