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科研学霸天团,48小时有问必答
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高效液相色谱A泵流动相为负压是为什么?有啥影响?
毛利小五郎的徒弟
开始的时候仪器有自检,会抽流动相,有个反压,这个是正常的.
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问
蛋白变性的缓冲盐体系对蛋白电泳或者转膜影响大吗?比如常用PBS或者裂解液稀释蛋白样品,为什么不用TBS
天一湖医者
影响还是很大的。选择合适的缓冲液对于维持一定pH值下蛋白质的稳定及保证实验的重复性很重要。PBS的缓冲能力强于TBS,TBS在pH7.0以下缓冲能力较弱。一般根据实验目的选用合适的缓冲液,如在蛋白纯化中进行阴离子交换层析,阳离子缓冲液首选TBS;阳离子交换层析时,阴离子缓冲液首选PBS。Western blot中使用PBS和TBS均可,根据需要选择合适的浓度。
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问
加Loading Buffer后还能测蛋白浓度吗?
毛利小五郎的徒弟
测不了,LB里的试剂会影响检测的,不准确
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问
做免疫共沉淀时,IP组的igg泳道在对应的目的蛋白位置跟互作蛋白位置,跟IP组泳道同时都有条带,怎么解决? 求教各位大神
huarenqiang5
你这个主要考虑抗体原因导致显影出现了条带。
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问
岛津20—A的高效液相怎么清洗自动进样器管路?仪器关闭状态下,流动相还继续流是为什么?接柱子的地方容易漏液怎么办?
huarenqiang5
使用的流动相应与仪器原保存溶剂能互溶,如不互溶,则先取下上次的色谱柱,照6.1.1-6.1.2的方法用异丙醇冲洗过渡,过渡完毕后,接上相应的色谱柱,换上本次使用的流动相,再按6.1.1顺序操作。色谱流路系统,从泵、进样器、色谱柱到检测器流通池,在分析完毕后,均应按5.1充分冲洗,特别是用过含盐流动相的,更注意先用水,再用甲醇一水,充分冲洗。漏液应请工程师或有经验的维修人员进行检查、维修。
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问
求助各位大佬们~目的蛋白P21和P16分子量分别为21和16,电泳恒压80v 1h,120v 1h,
NatureBios
p21和p16可以选择15%的分离胶,湿转200mA 45min或半干转15v 25min,膜用0.22um的,图片结果不理想,可以增加上样量和提高一二抗的浓度
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问
之前挑单菌落过夜培养后的菌液用甘油保存于-80℃,现在要做IPTG诱导的话,怎么做?
毛利小五郎的徒弟
最好是取解冻的甘油菌液于液体培养基过夜培养后,再去取菌液涂平板,这样得到的实验结果比较稳定。
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问
为什么我的内参会相差这么大?
c_Yeats
不同的样本用的内参是有差别的。心肌组织蛋白不建议用actin,蛋白定量以后统一上样量,市面上通用内参都不行的情况下,可以试试总蛋白量(TPS)作为内参。
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问
做WB几个空的条带有问题
bamboopiggy
感觉是蛋白浓度没有调齐,内参如何?
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问
请问大家蛋白灰度值柱状图的bar值是怎么来的(如下图)?是三次重复实验吗?
毛利小五郎的徒弟
是的,一般重复三次,三次结果稳定具有参考意义,取平均值即可
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问
大肠杆菌摇了5小时OD600才0.4左右,这是怎么回事,想要OD600为0.6还有必要继续吗
申东熙老伯
可以试着多摇一会儿,OD值和接种量以及接种时间都有关系。
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问
询问各位大佬怎么做标曲
Amor良
打开excel表格,选中数据区域,点击“插入”,点击“图表”右下角的小箭头。选择“X Y(散点图)”,选择第二项,点击“确定”,点击图形上的一个点,点击右键选择“添加趋势线”。勾选“显示公式”和“显示R平方值”,点击“关闭”,选择右侧图例,点击右键选择“删除”得到处理后的标准曲线。
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问
pkk223-3载体表达蛋白
balalaLy
菌液的状态很重要,加诱导剂前后要测OD值,不能摇菌摇过了
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问
flag标签融合蛋白ELISA试剂盒
juyue2010
看看abcam有没有,国产的是会出现一些问题
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问
什么细胞系表达α-syn?
毛利小五郎的徒弟
脑皮质神经元好胶质细胞表达明显。
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问
IPTG诱导表达离心收菌后怎么保存?
HeYiyangKFXV
姐妹有解决这个问题吗 同样困惑 超声来不及做了
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问
加IPTG诱导摇床培养时要不要用未加IPTG的一起摇床培养做对照?
huarenqiang5
建议设置未加IPTG的一起摇床培养做对照组进行对比分析,这样实验结果更有说服力。
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问
为啥泛素化酶UB的wb都是一大长条
bamboopiggy
因为检测的是所有发生泛素化的蛋白条带
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问
为什么加了蛋白酶抑制剂蛋白还是会降解呢
bamboopiggy
你加了蛋白酶抑制剂以后,收的蛋白是怎么保存的?有没有反复冻融?
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问
可以用甲醇溶液来作为流动相分离皂苷吗? 设置的参数有什么要求?
huarenqiang5
可以用甲醇溶液来作为流动相分离皂苷。
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