48小时,有问必答
丁香实验,轻松科研
已收录 10000+ 实验
48小时,有问必答
丁香实验,轻松科研
已收录 10000+ 实验
48小时,有问必答
登录
提问
提问
我要登录
|免费注册
丁香通
首页
|
实验问答
|
蛋白质
实验问答
4,424,377 科研人在看
科研学霸天团,48小时有问必答
我要提问
全部
细胞
免疫
蛋白质
PCR
DNA
RNA
微生物
动物
遗传
生物信息
其他
问
有哪位同志成骨诱导后茜素红染色是紫红色的,还有黄色的,请问哪些是钙离子呀
汤姆卜丽波
如果你诱导成功了,那钙质结节就会和茜素红反应变成红色,这上面紫红色的就是了
2 回答
193 围观
2 回答
193 围观
去回答
问
wb跑ng2
dxy_lgbve3zq
看图好像是胶歪了,导致你样品跑歪了,制胶的时候要把胶混匀。转膜的时候要低温转膜。
3 回答
77 围观
3 回答
77 围观
去回答
问
顺铂粉末溶解
balalaLy
用DMSO溶解成储存液,之后用助溶剂Tween80和peg400加水稀释
4 回答
2558 围观
4 回答
2558 围观
去回答
问
跑蛋白的条带较为弥散 是什么原因造成的
Eason老歌迷
wb条带弥散,可能有以下原因:一个是你的上样速度太慢了,弥散了。二个是电泳胶的浓度选择不对。
4 回答
82 围观
4 回答
82 围观
去回答
问
ECL检测后胶片显影之后曝光,胶片上面没有蛋白,原因有什么啊,压片10min,显影定影2min,胶片上什么也没有
inventbiotech
先确认蛋白是否转到了膜上,转膜后用丽春红染色可以检验,转膜后的胶可以用考马斯亮蓝染色,看看胶上是否还有蛋白,通常情况下,胶上还有蛋白的概率是很大的。每一步都有质控步骤,然后推导,找到原因是关键
4 回答
125 围观
4 回答
125 围观
去回答
问
目标蛋白大小在15-20KDa,半干法转膜55min,转完膜的胶用考马斯亮蓝染色发现蛋白还在胶上,但是marker已经转到膜上了
inventbiotech
转膜液很关键,转膜液这么小的蛋白SDS还是要控制量,转膜液选好了之后,转膜时间,选一个彩色maker做标志,但是maker过去了蛋白不一定过去,但是marker没过去,蛋白一定没过去
4 回答
97 围观
4 回答
97 围观
去回答
问
Bcl2一直孵不出来,用的是CST的15071,试过重新配一抗,但是还是出不来,有什么建议吗?
Eason老歌迷
你有没有用丽春红染,有没有条带。如果真出不来,你可以换一种抗体试一试。
3 回答
51 围观
3 回答
51 围观
去回答
问
蛋白质提取的浓度怎么确定
迟C迟
可以用紫外分光光度计直接测定0.1-0.5mg/ml的蛋白质溶液,此操作简便,测定迅速,不消耗样品,低浓度盐类不干扰测定。
3 回答
52 围观
3 回答
52 围观
去回答
问
我做的蛋白质分子量很小(10KD),请问怎么做WB?
Dfcaizjm
转膜200mA转40min封闭时间稍微长点
3 回答
87 围观
3 回答
87 围观
去回答
问
为什么我的细胞提取液中没有检测到目的蛋白?
inventbiotech
首先要考虑你的目标蛋白,他是在细胞的什么位置表达,是内源表达还是外源表达,丰度如何,外源表达要考虑他是否表达了。就是确认你的蛋白在你的样品里。再考虑蛋白提取的问题,目标蛋白没检测到,可能是蛋白提取时没提取到,这样就肯定检测不到了,你的目标蛋白如果是内源的,估计丰度不高,还可能不定位在胞质这些普通蛋白提取方法可以搞定的,可以考虑柱式法总蛋白提取。还有如果是丰度低,可以考虑针对目标蛋白所在亚细胞位置,
4 回答
69 围观
4 回答
69 围观
去回答
问
wb检测,投稿时是不是不能剪膜?
whilt-shirt
这个看杂志要求,有的杂志要求整张膜,有的不要求
6 回答
153 围观
6 回答
153 围观
去回答
问
细胞中NFKB和AKT蛋白表达低但磷酸化水平高,可以说明两个蛋白被激活了吗?
whilt-shirt
是的,只要磷酸化水平比上非磷酸化蛋白水平的值升高就能说明被激活了
4 回答
152 围观
4 回答
152 围观
去回答
问
做wb时,一个细胞过表达某种蛋白,这个细胞的总蛋白会发生变化吗?
天一湖医者
一般来讲会发生变化,一个细胞过表达某种蛋白,这个细胞的总蛋白会发生变化。
3 回答
50 围观
3 回答
50 围观
去回答
问
ARK1B1条带有时能曝出来有时曝不出来怎么办?
inventbiotech
从结果来看,是转膜的问题,优化转膜条件,但是有没有是因为蛋白样品,ARK1B1蛋白在样本中丰度如何,丰度不高建议针对蛋白所在的亚细胞结构进行分离富集,增加上样量。
3 回答
68 围观
3 回答
68 围观
去回答
问
为什么WB蛋白的杂带很多?
dxy_lgbve3zq
两个原因,可能是蛋白降解或者抗体浓度太高,特异性不强。解决办法是尽量冰上裂解,提出蛋白以后立刻煮蛋白使蛋白变性。另外可以适当调整抗体浓度,孵育时间,抗体不好的话需要更换抗体。
5 回答
197 围观
5 回答
197 围观
去回答
问
为什么用His的抗体 杂出了GST的条带?
抗体工
可以考虑换个his的抗体,his抗体也是识别HHHHHH,如果你目的蛋白里面有两三个连续的,然后抗体特异性又不好,也是可以识别的。
3 回答
281 围观
3 回答
281 围观
去回答
问
YTHDF2蛋白无条带
dxy_lgbve3zq
没有条带的原因有很多。你可以先用丽春红染膜,看在对应的位置有没有你要的条带,如果有,那就是抗体的问题或者曝光操作的问题。如果没有,那可能是上样量太低,转膜不成功,蛋白降解的问题。你也可以全膜摸一下这个目的蛋白的位置,因为有时候目的蛋白的位置和说明书上的不一定完全一致。
3 回答
51 围观
3 回答
51 围观
去回答
问
电泳的marker师姐说要加中间不能加两边,有什么原因吗?
VisionPanMMCS
最边上的胶可能均匀性不好,跑出来会歪掉
4 回答
76 围观
4 回答
76 围观
去回答
问
原核表达了目的蛋白融合蛋白88.3kDa,样品同时跑了两块SDS-PAGE一个做了考马斯亮蓝一个做了WB,但是WB条带很怪异
抗体工
第一建议Wb再重新做一下,弄个清晰的条带,方便确定蛋白是否表达。其次80多kd蛋白已经有点稍微大了,如果不表达,建议考虑真核系统
5 回答
143 围观
5 回答
143 围观
去回答
问
WB实验中的转膜缓冲液该如何配制?在文献中有看到不一样的配方
whilt-shirt
我们实验室是tris3.03g,甘氨酸14.4g,加双蒸水至800ml,然后再加200ml的甲醇
3 回答
134 围观
3 回答
134 围观
去回答
1
•••
69
70
71
72
73
•••
129
跳至
页
提问
48 小时有问必答
扫一扫
添加小程序
关注公众号
反馈
TOP
打开小程序