蛋白表达~求助

各位大佬，我用的BL21(DE3)plyss感受态细菌来表达蛋白，我大概在20天前做的转化，然后进行挑单克隆、摇菌并进行表达，在表达前我对摇的菌液进行了保种，那么现在能否继续用保种的菌进行活化，然后加IPTG进行表达？还是需要重新挑单克隆再进行表达呢？

今天试了一下用保种的菌进行表达，发现摇了4个多小时才能到0D600=0.5左右，不知道是否有其关系？