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科研学霸天团，48小时有问必答
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血小板测蛋白可以直接冻吗
毛利小五郎的徒弟
短时间可以，时间长蛋白质会变性所以不建议。
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问
western blot 相关实验
huarenqiang5
考虑以下几点原因：①. 因为蛋白上样量低或目的蛋白在来源组织或细胞中的表达量并不丰富造成。可适当加大蛋白上样量，也可通过提高抗体稀释度或采用灵敏度更高的发光底物来调整，如Enlight-plus。②. 蛋白没有充分转移到膜上。转膜后可通过预染Marker判断转膜效率，也可用丽春红染膜、用考马斯亮蓝染胶，判断转膜效率。③. 抗体效价不高，用量不足，孵育时间太短，或抗体反复使用保存不当而失活。可考虑更
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问
COIP实验中INPUT无目的蛋白，pulldown中能砸到目的蛋白，why？
huarenqiang5
主要考虑以下几点：（1）样品中目的蛋白未表达或者表达量低。这种 情况下建议确定目的蛋白的蛋白谱，确定它会表达。（2）可以适当增加裂解液，但要注意后续要将裂解液去除干净。（3）抗体使用量少，没有足够的抗体去捕获目的蛋白。建议增加抗体的使用量。（4）缓冲液、洗脱液的pH可能不能将目的蛋白洗脱。建议根据想要洗脱的蛋白质，调整溶液正确的二pH值。（5）抗体没有与免疫吸附磁珠结合。注意查看磁珠与抗体亚型是否
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问
请教一下各位老师关于ROC曲线位于参考线以下的问题
汤姆卜丽波
Roc就是该指标下的生存面积，原数据才是最准确的改动了后面的数据都对不上了
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问
HL-60和NB4细胞诱导分化问题
汤姆卜丽波
你可以做个梯度预实验按比例添加ATRA，找到合适的比例再大规模诱导
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问
类器官病毒包装进行稳转后续不需要药筛吗？
毛利小五郎的徒弟
稳转后不需要做药物筛选了，前期做就可以了
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问
求助贴，WB检测BV2细胞中TLR4的表达一直跑不出来
asswei
无条带的原因很多，要逐一排除哦，比如：抗体用错，转膜出错，抗原无表达，试剂失效等，都会导致空白条带。
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问
请问一下，问什么蛋白表达中，集菌破碎之后，液体是黄色的，而且过完分子筛之后，跑胶之后，条带还是很杂？
loveliufudan
蛋白质表达过程中，液体颜色的黄色可能是因为存在大量的细胞裂解产物或者富含色素的蛋白质。条带杂乱的问题可能是由于目标蛋白质表达量较低，或者存在其它杂质蛋白质或者表达产物。为了解决这些问题，您可以考虑以下几点：优化菌落培养条件以提高目标蛋白质表达量。在破碎细胞时使用更加彻底的方法，如超声波或高压均质等方法，以确保细胞完全破裂释放蛋白质。使用更加纯净的蛋白质分离方法，例如磷酸盐缓冲液（PBS）或甘氨酸盐
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请问一下透析袋前处理一般是直接用水煮沸10分钟就可以吗
毛利小五郎的徒弟
是的，煮沸消毒，少数的需要进行抗凝处理
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问
ROC曲线联合后面积反而小了？
asswei
其中的某个指标拉低了联合诊断面积。
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问
咪唑洗脱蛋白梯度顺序错了有什么影响吗，怎么补救
dxyc42u
应该是要重新洗脱了，没听说过有什么好的补救措施
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问
慢病毒载体转导增强剂
asswei
慢病毒载体转导增强剂有LVTE，聚乙烯醇，辅酶A，聚赖氨酸，硫酸羊膜素等。
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问
pspcas9质粒能代替plko1用三质粒系统包装慢病毒吗？
asswei
pspcas9质粒代替plko1用三质粒系统包装慢病毒的效果较差。
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问
蛋白质翻译后修饰发生的亚细胞定位是否可通过修饰位点预测。
huarenqiang5
Sionalp 可以对革兰氏阳性菌，董兰氏阴性菊和直核生物的蛋白质序列进行信号肽分析。预测采用了隐马尔可夫和人工神经网络技术的融合。其训练数据是从 SwisProt 第 29 版中挑选来的，分为真核生物，革兰氏阳性菌，革兰氏阴性菌三组。 除了 SignalP 可以对蛋白质序列进行信号肽分析外，还有诸如 Phobius、Philius、Spoctopus、Si
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问
如何将纤连蛋白包被过的孔板中的细胞消化下来
毛利小五郎的徒弟
可以用刮刀，但是要注意操作的轻柔，避免影响到细胞
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问
【求助】结晶紫染色李斯特菌生物膜
毛利小五郎的徒弟
一般脱色20min左右就可以进行酶试验检测了
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问
趋化因子SDF-1做MDA-MB-231细胞的迁移实验！没有效果啊！有没有大神帮一帮！！
huarenqiang5
可以参考一下这篇文献《CXCL12诱导乳腺癌细胞CXCR4表达并促进癌细胞骨转移》。
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问
请问这种该怎么配啊，是两个配好之后1比1混合还是最终的浓度，pH8.0是整体的还是EDTA-NA2的。
毛利小五郎的徒弟
是最终的浓度，ph也是整体的ph
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问
跑胶出现拱形是什么问题？
毛利小五郎的徒弟
胶的问题，胶制的不平整，调整模具后再跑
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问
内参3条为什么（βactin）
毛利小五郎的徒弟
考虑体系中有物质降解，所以会出现重复多条
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