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科研学霸天团,48小时有问必答
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为什么溴芬兰这样了 不理解
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BL21表达蛋白时,越用表达量越小,重新转化也失败了,求助怎么解决
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磷酸化蛋白质组在过柱富集分析等步骤后,怎么确定蛋白的磷酸化位点的?
百泰派克-李工
质谱技术是确定蛋白磷酸化位点的重要工具,在磷酸化蛋白质过柱富集分析后,接下来的实验流程如下:1、蛋白质消化将富集的磷酸化蛋白质用特定的蛋白酶(如胰蛋白酶)消化成较小的肽段。2、磷酸化肽段富集使用特定的亲和层析技术(如IMAC或TiO2)来富集磷酸化的肽段。这些富集方法能够特异性地结合磷酸化肽段,从而使其从非磷酸化肽段中分离出来。3、质谱分析将富集得到的磷酸化肽段进行质谱分析,最常见的是使用液相色谱
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在elisa中,若一抗带有his标签,那包被的抗原是不是就不能带his标签了?
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sds凝胶电泳上样时样品向上浮是什么原因啊?buffer和电泳液的浓度是配套的嘛
百泰派克-李工
SDS-PAGE(SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳)中样品向上浮的现象通常是由于以下原因造成的:1、样品准备问题:如果样品中含有大量的油脂或是有机溶剂,这些物质的密度可能低于水,导致样品在凝胶中上浮。确保样品在加入上样缓冲液后充分混合和加热,以保证蛋白质充分变性并与SDS结合。2、上样技术问题:在上样时,如果针头没有插入到凝胶的上样孔中,或者上样速度过快,可能会导致样品漂出上样孔。应缓慢、小心地将样品注
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page胶跑完蛋白染考马斯亮蓝,出现空染是什么情况呢,有时候能染出来,有时候空染。
百泰派克-李工
PAGE凝胶(聚丙烯酰胺凝胶电泳)在使用考马斯亮蓝染色后出现空染(也就是部分区域未染色或染色较浅)的情况可能由多种因素引起:1、蛋白质浓度过低:如果某些泳道中的蛋白质浓度太低,可能导致这些区域染色不明显或看不到条带。2、染色或脱色不均匀:如果在染色或脱色过程中,凝胶未能完全浸没在染色液或脱色液中,或者这些液体在凝胶中分布不均匀,也可能导致空染。3、蛋白质未完全转移到凝胶中:在上样过程中,如果蛋白质
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请问一下大家,电泳的时候样有点漏 成一条线 这是啥原因导致的啊
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高糖条件的内皮细胞成管
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HIF-1A蛋白纯化
百泰派克-李工
HIF-1α(缺氧诱导因子1α)是一种在缺氧条件下表达的转录因子,它在细胞适应缺氧环境中发挥重要作用。蛋白质纯化是一个复杂的过程,涉及多个步骤,确保获得高纯度和活性的蛋白。以下是一个基本的HIF-1α蛋白纯化步骤概述:1.细胞裂解:如果HIF-1α蛋白在细胞内表达,首先需要裂解细胞以释放蛋白。通常使用裂解缓冲液(含有非离子洗涤剂如Triton X-100或NP-40,以及蛋白酶抑制剂以防止蛋白降解
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Wnt3a 蛋白建议的转膜及电泳条件?
眼镜蛇001
分子量大概39,跟内参actin靠的近,建议可以用10-12%的分离胶,浓缩胶6%。电泳用100V跑浓缩胶,分离胶120V。转膜用200毫安恒流1小时到2小时。抗体看你样品种属,抗体来源不要跟样品种属一样就行。我们专业从事生物技术服务,性价比高,结果有保障,可先实验后付款。14286839
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wb实验时蛋白加热变性后有沉淀
百泰派克-李工
在Western Blot (WB) 实验中,蛋白质加热变性后出现沉淀是一个常见问题。通常由以下几个因素引起:1.蛋白质浓度过高:如果样品中的蛋白质浓度过高,加热时可能会导致蛋白质过度聚集和沉淀。2.样品缓冲液不适当:使用的样品缓冲液可能不适合所分析的蛋白质。例如,缓冲液的pH值或盐浓度不适当可能会影响蛋白质的溶解性。3.加热时间或温度不适宜:过高的温度或过长的加热时间可能会导致蛋白质结构受损,从
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为什么有些蛋白在肿瘤组织中高表达却在血液中低表达或检测不到?
百泰派克-李工
蛋白质在肿瘤组织中高表达而在血液中低表达或检测不到的现象可能由多种因素引起:1.组织特异性表达:有些蛋白质可能在特定组织中高表达,如肿瘤组织,但在血液中的表达水平较低。这是由于蛋白质的生物学功能和表达调控机制决定的。2.血液稀释效应:即使肿瘤细胞产生大量的特定蛋白质,这些蛋白质释放到血液中后,由于血液体积庞大,可能被大幅稀释,从而难以检测。3.蛋白质降解:血液中的酶系统可能会迅速降解某些蛋白质,使
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0.05摩尔磷酸盐缓冲配置
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用一定浓度的乙醇回流提取样品时,过滤浓缩好是进行冻干再上液相测量好,还是旋转浓缩好直接上液相测量好?
百泰派克-李工
在使用一定浓度的乙醇进行样品提取后,接下来如何处理样品以进行液相色谱(HPLC)测量,通常取决于样品的性质和实验的具体要求。这里有两种常见的方法:冻干和旋转蒸发(旋转浓缩),每种都有其优势和局限性。一、冻干:1.优势:冻干可以非常有效地去除所有溶剂,特别适用于热敏感物质。这种方法不会导致热降解,适合对热不稳定化合物的处理。2.局限性:冻干过程较慢,需要更多的时间。对于一些不易重溶的样品,冻干可能导
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求助怎么用imagej计算核浆比值
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过表达的带FLag标签的蛋白,可以用目标抗体检测到很强的带,但没法用标签抗体Wb检测到标签。原因是什么?
百泰派克-李工
在表达带有FLAG标签的蛋白时,如果可以用目标抗体检测到强烈的条带,但无法用标签抗体通过免疫印迹(Western Blot, WB)检测到标签,可能有几个原因:1.标签抗体的特异性或活性问题:可能是Flag标签抗体的特异性或活性不足。可能是抗体本身的问题,或者抗体已经过期或在储存过程中活性下降。2.标签位置的问题:Flag标签的位置可能影响抗体的识别。如果标签位于蛋白的内部或者被蛋白的其他部分遮挡
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请问一下,体外转录的RNA(双链DNA转录成RNA)跑电泳,我需要知道具体的分子量,需不需要变性的条件跑
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酵母蔗糖酶的制备中低温操作的目的
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lc3为什么老是在70kd有杂带啊
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问
蛋白在酶切之前就分成了相隔很近的两条带,在酶切后两条带分别减少,过akta后还是会出现相隔很近的两条带是什么原因,怎么解决?
百泰派克-李工
蛋白在酶切之前就分成两条相隔很近的带,并且在酶切和经过AKTA纯化后仍然出现这种现象可能有几个原因:1.蛋白异构体:可能存在蛋白的不同异构体或者蛋白质的不同翻译后修饰形式,如磷酸化、糖基化等。2.蛋白部分降解:蛋白可能在提取或处理过程中发生了部分降解,导致出现大小略有差异的多个片段。3.酶切不完全:如果两条带在酶切后分别减少,可能是酶切不完全导致的。酶切不完全可能是由于酶的活性不足、反应时间不够或
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