蛋白在酶切之前就分成两条相隔很近的带，并且在酶切和经过AKTA纯化后仍然出现这种现象可能有几个原因：
1.蛋白异构体：
可能存在蛋白的不同异构体或者蛋白质的不同翻译后修饰形式，如磷酸化、糖基化等。
2.蛋白部分降解：
蛋白可能在提取或处理过程中发生了部分降解，导致出现大小略有差异的多个片段。
3.酶切不完全：
如果两条带在酶切后分别减少，可能是酶切不完全导致的。酶切不完全可能是由于酶的活性不足、反应时间不够或酶与蛋白的比例不当等原因造成的。
4.聚合体形成：
某些蛋白在特定条件下容易形成二聚体或多聚体，这可能导致在电泳中出现两条接近的条带。
解决这一问题可以从以下结合方面入手：
