百泰派克-李工
SDS-PAGE(SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳)中样品向上浮的现象通常是由于以下原因造成的:
1、样品准备问题:
如果样品中含有大量的油脂或是有机溶剂,这些物质的密度可能低于水,导致样品在凝胶中上浮。确保样品在加入上样缓冲液后充分混合和加热,以保证蛋白质充分变性并与SDS结合。
2、上样技术问题:
在上样时,如果针头没有插入到凝胶的上样孔中,或者上样速度过快,可能会导致样品漂出上样孔。应缓慢、小心地将样品注入到凝胶孔中。
3、样体积过多:
如果上样量过多,超过了凝胶孔的容量,样品可能会溢出。确保上样量适合你使用的凝胶孔的容量。
此外,buffer和电泳液的浓度通常是配套的。SDS-PAGE使用特定的buffer体系,包括上样buffer、运行buffer和凝胶的制备buffer。这些buffer的pH值和离子强度对电泳过程中蛋白质的迁移有重要影响。使用不匹配的buffer可能会导致电泳效果不佳,例如蛋白质迁移不均匀、分辨率低或者条带模糊等问题。因此,建议使用配套的buffer体系,以确保实验的准确性和重复性。
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点样前,可以用水浴锅加热一下试试
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