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好久没有科研了,问个小白问题,wb抗体哪家比较好的?一抗二抗,准备实验的。
养点鱼吃火锅
一般还是选择进口品牌,写到文章里受认可度更高,也不是说国产抗体都不好,也有质优价廉的国产抗体。进口品牌比如abcam,CST,thermo等。进口的也有可能效果不好,需要试一下。
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问
做WB时,抗体非特异性结合,与哪些因素有关?
Eason老歌迷
一个是抗体浓度问题。一个是抗体和fc受体结合。
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问
westernblot为什么条带有尾影 怎么处理?
Eason老歌迷
可能是你的一抗浓度太高了,你把一抗浓度稀释完在看。
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问
跑蛋白最后显影的时候膜上有一些斑点,不是很干净是为什么?怎么解决?
Eason老歌迷
你配置封闭液的时候,取上清,别取沉淀。还有就是封闭时间稍微延长。还有你的抗体浓度也可以稀释来看看
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问
请问转膜后封闭使用快速封闭液还是自行配置的5%脱脂奶粉效果好呢?
ZMY_foep
5%的脱脂奶粉好!也可以用牛血清蛋白
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问
转膜时没有气泡,为什么显影的时候会有像气泡一样的空泡而且很大,确定不可能是转膜时有的
Eason老歌迷
转膜没有气泡,可能就是你敷抗体的时候出了问题,是不是你有一部分膜抗体没孵上啊。
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问
曝光总是条带附近背景很高是怎么回事?
天一湖医者
抗体浓度过高。如果使用过高浓度的抗体,它们可能与印迹膜发生非特异性结合。 这将导致整个印迹的均匀高背景。
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问
蛋白质免疫印迹实验中wb转膜问题
Eason老歌迷
转膜的时候可以切膜,我们都是切开的。当然你也可以不切,这样的话,你就是一起孵抗体,这样的话就是比较费抗体。你的背景比较脏,建议你增加封闭时间,或者是你封闭液取上清,别混沉淀。
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问
蛋白质的毛细管电泳分析实验中,采用整个毛细管进样技术,样品可以浓缩多少倍?
Eason老歌迷
要是70%,可以浓缩差不多100倍吧。那整个的话可以浓缩130倍左右。
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问
在薄层分析等电聚焦的方法中,有哪些方法可以进行pH 梯度测定?
天一湖医者
等点聚焦电泳的测定pH梯度的方法有四种:1. 将胶条切成小块,用水浸泡后,用精密pH试纸或进口的细长pH复合电极测定pH值,然后作图。2. 用表面pH微电极直接测定胶条各部分的pH值,然后作图。3. 用一套已知不同的pI值的蛋白质作为标准,测定pH梯度的标准曲线。4. 将胶条于-70℃冰冻后切成1mm的薄片,加入0.5ml 0.01M KCl,用微电极测其pH。
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问
免疫组化和WB操作可以用同一种抗体吗
天一湖医者
如果所用的抗体识别的是蛋白上连续的几个氨基酸,也就是线性表位,那么这种抗体可同时用于免疫组化和WB,而如果抗体识别构象形表位,则只能用于免疫组化。
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问
提取的蛋白放在冰箱-20可以反复冻融几次
dxy_amuaa0re
最好不超过5次。分装EP管减少冻融次数。
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问
WB样本扩散了,怎么办
Eason老歌迷
是不是你的上样时间太长了啊,上样一定要迅速。。你同时跑几块胶呢?既然已经扩散了,那么就赶紧调高电压,跑完看看吧,不行就在跑一次吧
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问
COIP为啥IgG组有条带
bamboopiggy
可能你的目的条带在轻链或重链附近,所以IgG对照组也有条带
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问
免疫组化和WB可以用同一种抗体吗?
天一湖医者
可以,如果所用的抗体识别的是蛋白上连续的几个氨基酸,也就是线性表位,那么这种抗体可同时用于免疫组化和WB,而如果抗体识别构象形表位,则只能用于免疫组化。
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问
上下槽缓冲液有何要求,怎样才能达到最佳效果?
天一湖医者
无特殊要求。但一般是上槽放新鲜的缓冲液,下槽可以是重复使用过一两次的缓冲液。
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问
我做的蛋白质分子量很小(10KD),请问怎么做WB?
天一湖医者
1)可选择孔径0.22um的PVDF膜或者NC膜,转膜时间缩短,另外可采用Tricine-SDS-PAGE体系; 2)也可以选择PSQ 膜,同时缩短转移时间。也可以将两张膜叠在一起,再转移。其他按步骤即可。
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问
一般一抗和二抗是用什么稀释的呀?
申东熙老伯
用TBST稀释,如果是用牛奶封闭的,也可以直接用牛奶稀释,因为封闭用牛奶也是用TBST配的。
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问
提取蛋白后浓度显示基本正常,但是转膜后丽春红染色看不到蛋白的位置,有marker,这是怎么回事呢?
天一湖医者
可能是转膜没转过去,或者转过了。你电转缓冲体系有问题,可以试着加点SDS,会好一点。
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问
在封闭之前膜需要漂洗吗?是用什么漂洗呀?
天一湖医者
不用洗的,封闭前后都不要洗,封闭后的更没有必要洗,因为我们的抗体就是用封闭液来配的。效果都很好!
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