efoda
有大佬可以分享一下H9C2细胞的Myh7,Anp,Dkk2引物序列嘛?我自己设计了十几条都p不出来,有的是在Ct=45左右才有,但是溶解温度在80度,应该不是产物,不知道是不是基因本身表达量低还是什么原因
土井挞克树
考虑是cdna的纯度不够,建议选用纯度高的cdna
周末也要努力呀
NCBI网站BLAST一下引物特异性,也可以去搜寻参考文献借鉴别人引物
huarenqiang5
考虑可能是在稀释引物的时候有污染,引物被消化了。或引物本身就比较容易降解。
高山云初
可能有几点原因:1、低质量的cDNA:cDNA合成过程中可能存在RNA降解、反转录不完全或反转录过程中引入的污染物等问题,导致cDNA质量不佳,从而影响PCR扩增效果。 2、PCR反应条件不当:PCR反应条件包括温度、反应时间、引物浓度、酶浓度、缓冲液等,如果这些条件设置不当,可能会影响PCR扩增效果。 3、引物设计问题:引物的设计可能存在问题,比如引物长度不合适、引物序列中存在不稳定结构、引物与模板匹配度不佳等,都可能导致PCR扩增失败。 4、模板DNA质量问题:如果模板DNA质量不佳,比如DNA降解、污染等问题,也可能导致PCR扩增失败。 5、酶的问题:PCR反应中使用的酶可能存在质量问题,比如酶的纯度不够、酶失活等问题,都可能影响PCR扩增效果。 6、反应管或设备的问题:PCR反应管或设备可能存在问题,比如管子老化、污染等问题,也可能导致PCR扩增失败。
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