请教,为什么扩不出来
丁香园论坛
1624
基因序列cds,引物,目的片段如下:
atggggacgccgggggaggggctg
301 ggccgctgctcccatgccctgatccggggagtcccagagagcctggcgtcgggggaaggt
361 gcgggggctggccttcccgctctggatctggccaaagctcaaagggagcacggggtgctg
421 ggaggtaaactgaggcaacgactggggctacagctgctagaactgccacctgaggagtca
>>>>>>>>>>>
481 ttgccgctgggaccgctgcttggcgacacggccgtgatccaaggggacacggccctaatc
>>> *****************************************
541 acgcggccctggagccccgctcgtaggccagaggtcgatggagtccgcaaagccctgcaa
***********************************************************~Kbr_~H~M~2~1~Kbr_~H~M~2~1 601 gacctggggctccgaattgtggaaataggagacgagaacgcgacgctggatggcactgac
***********************************************************~Kbr_~H~M~2~1~Kbr_~H~M~2~1 661 gttctcttcaccggccgggagtttttcgtaggcctctccaaatggaccaatcaccgagga
********_~8lt~J~8lt~J~8lt~J~8lt~J~8lt~J~8lt~J~8lt~J~8lt~J~8lt~J~8lt~J~8lt~J~8lt~J~8lt~J~Kbr_~H~M~2~1 aggtttacctggttagtggc
721 gctgagatcgtggcggacacgttccgggacttcgccgtctccactgtgccagtctcgggt
781 ccctcccacctgcgcggtctctgcggcatggggggacctcgcactgttgtggcaggcagc
841 agcgacgctgcccaaaaggctgtccgggcaatggcagtgctgacagatcacccatatgcc
901 tccctgaccctcccagatgacgcagctgctgactgcctctttcttcgtcctgggttgcct
961 ggtgtgccccctttcctcctgcaccgtggaggtggggatctgcccaacagccaggaggca
1021 ctgcagaagctctctgatgtcaccctggtacctgtgtcctgctcagaactggagaaggct
1081 ggcgccgggctcagctccctctgcttggtgctcagcacacgcccccacagctga
KEYS (in order of precedence):
~undefined****_target~Kbr_~H~M~2~1~8gt~J~8gt~J~8gt~J~8gt~J~8gt~J~8gt~J_left_primer_: ccacctgaggagtcattgc
<<<<<< right primer : aggtttacctggttagtggc
Tm值60℃左右。PCR条件为:94℃,30S;55℃,30S;72℃,60S,35CYCLES.
没扩到目的片段,只有β-actin.
谁能帮我分析一下原因,谢谢!
atggggacgccgggggaggggctg
301 ggccgctgctcccatgccctgatccggggagtcccagagagcctggcgtcgggggaaggt
361 gcgggggctggccttcccgctctggatctggccaaagctcaaagggagcacggggtgctg
421 ggaggtaaactgaggcaacgactggggctacagctgctagaactgccacctgaggagtca
>>>>>>>>>>>
481 ttgccgctgggaccgctgcttggcgacacggccgtgatccaaggggacacggccctaatc
>>> *****************************************
541 acgcggccctggagccccgctcgtaggccagaggtcgatggagtccgcaaagccctgcaa
***********************************************************~Kbr_~H~M~2~1~Kbr_~H~M~2~1 601 gacctggggctccgaattgtggaaataggagacgagaacgcgacgctggatggcactgac
***********************************************************~Kbr_~H~M~2~1~Kbr_~H~M~2~1 661 gttctcttcaccggccgggagtttttcgtaggcctctccaaatggaccaatcaccgagga
********_~8lt~J~8lt~J~8lt~J~8lt~J~8lt~J~8lt~J~8lt~J~8lt~J~8lt~J~8lt~J~8lt~J~8lt~J~8lt~J~Kbr_~H~M~2~1 aggtttacctggttagtggc
721 gctgagatcgtggcggacacgttccgggacttcgccgtctccactgtgccagtctcgggt
781 ccctcccacctgcgcggtctctgcggcatggggggacctcgcactgttgtggcaggcagc
841 agcgacgctgcccaaaaggctgtccgggcaatggcagtgctgacagatcacccatatgcc
901 tccctgaccctcccagatgacgcagctgctgactgcctctttcttcgtcctgggttgcct
961 ggtgtgccccctttcctcctgcaccgtggaggtggggatctgcccaacagccaggaggca
1021 ctgcagaagctctctgatgtcaccctggtacctgtgtcctgctcagaactggagaaggct
1081 ggcgccgggctcagctccctctgcttggtgctcagcacacgcccccacagctga
KEYS (in order of precedence):
~undefined****_target~Kbr_~H~M~2~1~8gt~J~8gt~J~8gt~J~8gt~J~8gt~J~8gt~J_left_primer_: ccacctgaggagtcattgc
<<<<<< right primer : aggtttacctggttagtggc
Tm值60℃左右。PCR条件为:94℃,30S;55℃,30S;72℃,60S,35CYCLES.
没扩到目的片段,只有β-actin.
谁能帮我分析一下原因,谢谢!