【求助】请教TOPflash检测

本人近日做TOPflash实验检测wnt通路的激活情况，遇到些许问题，希望做过TOPflash assay或了解wnt通路的战友解疑答惑。
1、看了些相关文献，既有分别转染TOPflash和FOPflash，结果用TOP/FOP值来表示的；也有只转染TOPflash，然后就用TOP值来表示的。不知这是什么原因，在什么情况下不用FOP？ 我因为刚刚接触，用的是分别转染TOPflash和FOPflash，但遇到了问题。
2、FOPflash值不稳定，并不像有些文献里的那样，各组之间FOP值都不变，我的有时变化2-3倍。而且FOP值很高，同样量的TOP和FOP，FOP值远高于TOP，除非激活剂强刺激才使TOP/FOP值达到个位数。
3、有个基因，做了几次，发现TOP值没怎么升高，而FOP值降的挺厉害，导致TOP/FOP值升高，这能说明通路激活了吗？

请有经验的战友示下。

就没有一个人做过？ 自己顶起来！

关注中，顶起

Top和Fop序列基本上一致的，Top的荧光素酶启动子上有几个Lef/TCF的结合位点，而在FOp是突变的，因此Top/Fop可以检测Wnt的活性改变。
1.应该是要用Top/FOP值来表示结果，Fop值当作一个背景值。
2.Fop是比较稳定的，特别是在组内。不过你说“各组之间”，有可能不同处理会有影响，不过应该不影响结果分析。一般Top会比Fop高或相似，除非你的处理是抑制Wnt通路的。
3.如果Fop值有降低，应该不是Wnt通路的改变引起的。Top和Fop除了Wnt的反应元件不同，其余都一样，如果Fop有下降，Top也应该会下降。

你的Top、Fop质粒是否标记反了，或治疗哪里有突变？
另外在转染是要共转染另外一种荧光素酶，如pRL-TK作内参。

请问LZ具体怎么做的呀？有没有详细的步骤呀

楼主说说具体步骤吧，我也想了解下，看看实验中能否用到

实验室菜鸟，同求流程与步骤。谢谢

楼主用的是什么检测试剂啊？能用Dual-Luciferase ® Reporter Assay来检测吗？求回复

请问是用这个试剂来检测吗？最近我也要做这个实验

我们实验室用过Topflash和FopFlash，就是用promega公司的
??
Dual-Luciferase ® Reporter Assay试剂盒检测的。