【求助】转染率低，能用topflash/fopflash检测TCF/LEF转录活性吗？
丁香园论坛
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我想做某因素对神经干细胞Wnt通路的影响，检测TCF/LEF转录活性打算采用topflash/fopflash的方法，可是用一般的脂质体转染的方法转染率很低，20-30%，也有人说5-10%。想问一下荧光素酶报告基因法对转染率有要求吗？实验条件有限，核转染的方法做不了。我是否可以采用EMSA或CHip的方法来替代荧光素酶报告基因的方法来检测Wnt通路是否被激活？如果发英文文章的话，被认可吗？
EMSA或ChIP？我感觉不行吧。
这些可能相对的说明转录因子结合能力变化了，但是结论很弱。不建议采用。
荧光报告酶系统很敏感，我觉得可以试试。
qRT试过了？
WNT里面还有两个途径，你也需要注意。
这些可能相对的说明转录因子结合能力变化了，但是结论很弱。不建议采用。
荧光报告酶系统很敏感，我觉得可以试试。
qRT试过了？
WNT里面还有两个途径，你也需要注意。
qRT是指real-time PCR吗？还没做，现在在订购试剂。您是不是觉得我应该先利用qRT发现beta-catenin有改变之后再定购topflash/fopflash的试剂盒？如果beta-catenin没有改变的话，就没有必要做检测TCF/LEF转录活性的检测了呢？
我现在只想研究经典的Wnt-beta-catenin通路，对其他两个通路还不怎么了解。不知是否行得通？
我现在只想研究经典的Wnt-beta-catenin通路，对其他两个通路还不怎么了解。不知是否行得通？
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