qPCR熔解曲线都是乱的，荧光信号强度也不高，9个孔4个过不了阈值没Ct，为什么？

qPCR引物和普通pcr不同，你的引物是否正确？

还有软件设置，是否正确？

试剂和仪器兼容吗？

可能是反应体系污染，结合NTC和NRC结果确认污染情况，建议从水，引物，酶和环境等逐一排除污染。也可能是试剂暴露在强光或高温下导致试剂失效，建议用新的试剂做对比实验。或者是仪器长时间未校准，建议定期进行仪器校准保养可能是。耗材与仪器不匹配，需确认对应仪器对耗材的要求。

大概率是引物问题，再设计一对试试

1.要么是你的机器有问题了，2，要么就是你的酶有问题了，3，就是所有引物都是你新设计的，没有用过，4，你的cDNA降解了。