RT-PCR的相关问题？

只合成第一链就可以做RT-PCR，随着扩增过程，会形成第二链的。

可以的，完全没问题。只是咱合成的时候都是那第一条链当做引物合成链，用第二个和第一个似乎大同小异

RT-PCR中合成第一链cDNA为RNA和DNA组成的“杂双链”，在设计PCR的引物时候也是根据cDNA第一链设计的，因此将第一链cDNA可以用来PCR。

第二链cDNA是在第一链cDNA的基础上使用RNAase将RNA消化，利用百度百科上的几种方法合成与第一链cDNA互补的第二链cDNA，此刻就是构成了真正的，不包含RNA的“双链cDNA”，对双链cDNA修饰后用于构建cDNA文库。

当然合成第二链cDNA后也能用作PCR反应

所以合成第一链cDNA用来PCR可以，想要再合成第二链cDNA做PCR也可以。