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科研学霸天团，48小时有问必答

PCR

问PCR片段的时候，总是中间有一段序列缺失，大概200bp，但是前后都是对的，这是怎么回事啊？

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很可能是模版复杂结构导致，聚合酶扩增时候跳了，建议用更高温度变性的聚合酶，或者加一些CG bf

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问请问为什么会出现这种样子的荧光q曲线？

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问天狼星红染色和massion染色的区别是什么？在用途上

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问鉴定基因型，酶切后跑胶，一直显示一条带，感觉是没切开，是什么原因啊

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问详细介绍引物设计原则

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问巢式Pcr两轮都无条带应该如何解决

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问扩CDS全长的引物设计R端引物CG含量和tm值过高怎么处理

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问PCR产物跑PAGE结果如图，是什么原因呢？

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问qPCR同一批样，内参不同，结果相反

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问请问一下使用基因特异性引物逆转录进行的qpcr内参怎么弄呢？

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问求parkin引物序列？

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问PCR反应条件的三要素

珠海舒桐

PCR（聚合酶链反应）是一种分子生物学技术，用于放大特定的DNA片段。PCR反应条件的三要素通常指的是：1. 模板DNA：这是需要被扩增的DNA片段。它可以是基因组DNA、质粒DNA或任何其他形式的DNA。2. 引物（Primers）：这些是短的单链DNA片段，它们与目标DNA序列的两端互补，用于指导DNA聚合酶开始合成新的DNA链。3. 热稳定DNA聚合酶：最常见的是Taq聚合酶，它能够在PCR

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问RNase I的特点及使用方法？

珠海舒桐

RNase I 是一种核糖核酸内切酶，它来源于大肠杆菌，主要作用是降解单链RNA。以下是RNase I的一些特点和使用方法：RNase I 的特点：特异性：RNase I 能够特异性地降解单链RNA，在所有四个核苷酸（腺嘌呤、胞嘧啶、鸟嘌呤和尿嘧啶）后切割。热稳定性：RNase I 可以通过将样品加热至70°C来灭活，这使得它在实验中易于控制。广泛的应用：RNase I 在DNA纯化过程中用于降解

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问实验过程，流程，注意事项

珠海舒桐

等位基因特异性PCR（Allele-Specific PCR, AS-PCR）是一种用于检测特定等位基因的PCR方法，它通过设计特异性引物来区分不同的等位基因。以下是等位基因特异性PCR的实验流程、注意事项以及一些技巧：实验流程：引物设计：根据已知的等位基因突变，设计引物的3'末端在可能发生突变的位置。需要设计至少三条引物：两条分别含有待测DNA中突变位点的突变碱基及正常碱基，另一条为正常对侧引物

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问将二者测浓度后等摩尔数加入并使总量不超过 100 ng？

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问突然PCR扩不出来，但定量浓度很高

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问转录因子下游靶基因变化的检测时间

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问RPA产物怎么纯化？

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问46bp的条带要胶回收怎么跑清晰

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问各位老师，请问qPCR重复性的问题

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