pcr扩增有问题怎么办？

如上图所示，从左向右每三个为一对引物，编号为1，2，3，4，中间是marker，大小100－600bp，反应体系15微升，引物0.35ul，DNA模板0.5ul，水6.3ul，mix7.5ul，反应体系:95，3min，95，20s，59，20s，72，30s，72，5min，4，保存，35个循环，请大家帮忙看看可以怎么改进，2号和4号引物跑的有条带了，1号还差点意思，看不清，3号杂带有点多了