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9 kDa左右蛋白带GFP,可观察到绿色荧光,但GFP标签抗体WB检测不到重组蛋白,空载正常

相关实验:用 GST 融合蛋白检测蛋白质-蛋白质相互作用实验

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好小只呀

大家有什么经验可以分享吗?如何解释这种现象呢?求解答,谢谢

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2 个回答

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loveliufudan

有帮助

有几种可能导致您无法检测到GFP标签的重组蛋白:

GFP标签没有正确地折叠成其活性构象。这可能会影响抗体的结合,使其无法检测到标记的蛋白。您可以尝试使用其他抗体或试剂,例如融合蛋白的亲和标签(如His标签)。

GFP标签可能已被降解或裂解,导致无法被抗体检测。这可能会发生在特定的实验条件下,例如高温、酸碱度变化或重组蛋白在某些条件下长时间存储。您可以尝试优化您的实验条件或使用其他标签。

您的抗体可能存在交叉反应或失效。您可以尝试使用其他抗体或批次的抗体,并且应该包括相应的阴性对照组来评估抗体的特异性和灵敏性。

您的重组蛋白可能在WB检测中无法检测到,因为蛋白的表达量太低。您可以尝试使用更敏感的检测方法,例如荧光定量PCR或ELISA。

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土井挞克树

有帮助

wb检测不到蛋白没有表达出来,重新进行蛋白验证。

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