最近酶切连接转化后一直没菌落，一般问题出在哪

这个涉及的就比较多了，可能载体构建时设计的问题，或者筛选的条件不合适，或者培养条件不合适，或者感受态转化效率低，可以考虑设置对照去检查自己的实验体系

可能原因有很多，比如培养基的问题，确认抗性是否正确，也有可能是连接转化失败，还有可能是产物对转化的菌种有毒性

可能是酶切片段没有切好或者是连接体系中载体与片段的比例不合适，可以适当增加片段的体积再尝试连接转化看看。

一般情况下是没连上，因为也没有空载的话，肯定是没连上，或者看看感受态有没有问题

转化的时候有误,可以重新实验。目的基因和载体都切开,特别是目的基因如果是PCR后直接酶切效率会较低;载体上两个酶切位点连在一起,感受态的效率问题,转化过程对不对,如抗生素加的对不对。 如果没有弄错,那就需要改动连接体系,载体和片段的数量比在1:5-1:10之间,片段越小就多加点。还有一个就是感受态效率,做连接的感受态效率要在10^6以上。想想操作过程当中有没有错误,有时候涂板的耙子温度太高了,菌液离酒精灯太近了,都会烫死细菌的。

一般是连接的两片段的比例不合适，也可能是感受态不行，或者板子抗性有问题，转化一般要做阳性和阴性对照，要排除板子，质粒，或者是感受态细胞的问题

同时做个阳性对照，确保酶切的酶是好的。连接酶是好的，感受态是好的