用NEB的BpuEI酶1ul，切1ug的质粒失败，多加酶也不行，是酶量不够？应该用多少计量？

酶切体系商业化很稳定，首先要确定自己的酶切位点是不是正确

酶量是够的，你可以看看说明书上对于酶活性的定义，根据你的质粒浓度和量来计算需要的酶量。一般情况下1ul绝对够的。

10x buffer有没有失效？如果buffer没有分装，反复使用的话也是影响酶切效率

你先要确定你的酶切位点没有选错，再就是你们的酶没有失效。否则加多少都没用。

酶量应该差不多，你用的酶切时间是多少，可以增加一下酶切时间试试，NEB的内切酶建议的酶切时间是37°C，30 min，通常延长一下时间会更好，如果实在很难切开的话，可以延长至4 h或过夜！