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已经测序正确的菌液,再提质粒时发现酶切验证切不开,酶活性没问题。酶切位点之前也是切过得。是什么原因呢

相关实验:DNA 的酶切与连接

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汤姆卜丽波

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7 个回答

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dxy_l3h8h19

有帮助

是不是操作有误啊?还有,已经测序正确了为什么还要酶切验证?如果是单酶切的话切没切开可能差距不大,看不出来有没有切开。

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灵枢天问

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可能是在提质粒过程中发生了基因重组。

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天一湖医者

有帮助

可能是由于加的限制性内切酶的量不够。或者酶切的时间不充足。

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迟C迟

有帮助

可能是测序正确的菌液在扩增过程中被污染了,可以再PCR验证一下目的片段还在不在。

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bamboopiggy

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怀疑菌液中质粒丢失或污染了。可再送一次测序

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balalaLy

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有没有可能是酶或者buffer出现问题了?

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未来9

有帮助

可能原因:

1.反应体系不合适;

2.底物不对,出现甲基化等:

3.酶活性丢失。

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