【求助】请教关于xbaI酶切位点甲基化的问题（看了这么多帖子，都好象没分析到位啊）

在xbaI酶切位点上：T^CTAGA碱基对应的是AGATC^T，因为质粒是双链，所以在质粒的xbaI酶切位点上中间肯定有GATC，所以说：我觉得理论上只要是dam+细菌提出来的质粒，xbaI酶切位点都受甲基化影响而切不开.但是我见过别人也是用dam+菌扩增过质粒，用xbaI也可以切开它的酶切位点~~~所以我就迷糊了，请各位大侠们多多指点，小弟在此感激不尽了~~~

顶，有没有人知道啊，急啊，谢谢大家了

我的意思是不是没说清楚啊，呵呵，不好意思啊

我的意思是在xbaI酶切位点上，双链中的其中一条链肯定是 AGATC^T ，这个酶切位点中间本身就有dam甲基化的识别序列，所以只要是dam+细菌提出来的质粒，xbaI酶切位点都受甲基化影响而切不开，但实际并非如此，请大家指教啊！！！！！ !

我今天用了takara的

E.coli Competent Cells HST04 dam-/dcm-
感受态细菌，但是酶切还是没有成功，我不知道为什么了，请大家支招，在下谢过了先

我碰到这个问题，构建质粒时，下游引物的设计 在终止密码子TGA后接个xba I 酶切位点，抽质粒后xba I 老是切不开，后来在一本书上看到答案。

The restriction enzyme recognition site doesnot have to span the entire methylation site to be blocked. Overlapping methylation sites can cause

a problem. An example is the XbaI recognition site 5- TCTAGA 3 . Although it lacks the GATC dam methylase target,

if the preceding 5 two bases are GA giving GATCTAGA or the following 3 two bases are

TC giving TCTAGATC, then the dam methylase blocks XbaI from cutting.

——Molecular Biology Problem Solver: A Laboratory Guide.

顶顶顶