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我合成了一段序列,公司送来了液体状态的质粒,我做了转化,两天才长出来一个菌落,这个正常吗?

相关实验:重组质粒的连接、转化及筛选

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宁儿小贤

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9 个回答

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汤姆卜丽波

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测一下质粒浓度,然后估计是抗性平板没选择对。

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dxy_a3ehs9w7

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通常情况下,肯定不正常。细菌繁殖很快,过夜就可以观察到了菌落。

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迟C迟

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什么质粒,如果质粒比较特殊,序列比较长,两天长出来也是可能的,观察菌落形态是否正常,做好必要的验证即可。

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Keven轩

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不太正常,应该是菌在冻存的过程中死的太多了,或者是质粒浓度太低

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Guoood

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建议跟公司沟通,了解这种质粒的抗性及使用的感受态菌种类,两天才长出的菌不一定是目的质粒的菌落,也可能是杂菌。

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bamboopiggy

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不正常,这么长时间,可能是杂菌。你先和公司确定你没有弄错平板的抗性。然后再测个浓度,看有没有质粒

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天一湖医者

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一般的情况是10h后可以看到菌落,14-16h就可以做下一步鉴定了,建议你重新确认平板抗生素的正确与否,重新做连接转化。

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dxywode

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建议你重组吧,原来重组好的质粒很可能没有了,实在不行在找人要原来的质粒,我曾经因此耽误了几个月。

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未来9

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转化不长菌的原因很多。

1感受态细胞不行,这个一般都是同时转化一个已知的质粒,如果质粒长了,就可以排除。

2转化过程发生错误,同样用质粒做对照。

3抗生素加错了或者抗生素浓度过高。

4连接不成功。转化时连接产物的浓度最起码要十几纳克,如果只有几纳克,转化效率再低点,就不长菌了。另外如果是平末端连接的话,效率更低。

做转化要加对照的,一个阳性一个阴性。你这样不加对照去做,很难找到失败的原因

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