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质粒转化

&丁香园

107917

[ 基本原理 ]


将质粒 DNA 导入细菌的过程称为转化( Transformation )。此感受态细菌细胞在 CaCl 2 低渗溶液中膨胀为球状(感受态细菌的制备,见前)。质粒 DNA 与 CaCl 2 形成抗 DNase 羟基 - 磷酸钙复合物黏附于细菌表面,经 42℃ 短时间热冲击处理,促进细胞吸收 DNA 复合物。在丰富培养基上生长数小时后,球状细胞复原并分裂增殖。被转化的细菌中,外源基因得到表达。在选择性培养平板上,可选出所需的转化子(即含有质粒 DNA 的细菌)。钙处理的感受态细胞,一般每微克 DNA 能获得 10 5 ~ 10 6 个转化子。除化学方法转化细菌外,还有电穿孔法( Electroporation ),其转化率可高达 10 9 ~ 10 10 个转化子 /μg 质粒 DNA 。

[ 器材 ]

1 .培养皿 2 .恒温培养箱

[ 试剂 ]

1 . LB 培养基

2 .选择性 LB 琼脂培养平板(含氨苄青霉素,终浓度为 50μg/ml )

3 .氨苄青霉素 100 mg/ml

4 .宿主细菌:经 100 mmol/L CaCl 2 处理的感受态细菌 DH5α

[ 操作步骤 ]

• 取 50 μL 大肠杆菌感受态细胞,加入适量质粒(体积不得超过 4 μL )冰浴 30 min 后, 42℃ 热激 90 s ,马上放回冰上,冰浴 2 min ;加 400 μL LB 培养基,于 37℃ 摇床慢摇振荡培养 45-60 min ;取 50-100 μL 涂在含有氨苄青霉素( 100 μg/mL )的 LB 固体培养基上, 37℃ 倒置培养过夜。

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