质粒转化

[ 基本原理 ]

将质粒 DNA 导入细菌的过程称为转化（ Transformation ）。此感受态细菌细胞在 CaCl 2 低渗溶液中膨胀为球状（感受态细菌的制备，见前）。质粒 DNA 与 CaCl 2 形成抗 DNase 羟基 - 磷酸钙复合物黏附于细菌表面，经 42℃ 短时间热冲击处理，促进细胞吸收 DNA 复合物。在丰富培养基上生长数小时后，球状细胞复原并分裂增殖。被转化的细菌中，外源基因得到表达。在选择性培养平板上，可选出所需的转化子（即含有质粒 DNA 的细菌）。钙处理的感受态细胞，一般每微克 DNA 能获得 10 5 ～ 10 6 个转化子。除化学方法转化细菌外，还有电穿孔法（ Electroporation ），其转化率可高达 10 9 ～ 10 10 个转化子 /μg 质粒 DNA 。

[ 器材 ]

1 ．培养皿 2 ．恒温培养箱

[ 试剂 ]

1 ． LB 培养基

2 ．选择性 LB 琼脂培养平板（含氨苄青霉素，终浓度为 50μg/ml ）

3 ．氨苄青霉素 100 mg/ml

4 ．宿主细菌：经 100 mmol/L CaCl 2 处理的感受态细菌 DH5α

[ 操作步骤 ]

• 取 50 μL 大肠杆菌感受态细胞，加入适量质粒（体积不得超过 4 μL ）冰浴 30 min 后， 42℃ 热激 90 s ，马上放回冰上，冰浴 2 min ；加 400 μL LB 培养基，于 37℃ 摇床慢摇振荡培养 45-60 min ；取 50-100 μL 涂在含有氨苄青霉素（ 100 μg/mL ）的 LB 固体培养基上， 37℃ 倒置培养过夜。