【求助】请问质粒转化感受态细胞的原理是什么

cnstr14 wrote:
有个问题请教一下前辈们，当质粒与感受态菌混在一起做转化时，同一个菌是否有可能吸收进不同的质粒载体，比如同时吸收了含有不同目的基因的载体进入细胞？若有可能，那为什么挑去单克隆去测序，往往是单一目的片段的。若不可能，请告诉我为什么。谢谢

zjubell wrote:
理论上当然可能吸收进不同质粒。特别是有一些多拷贝菌，能吞进几十个。
但你实验的目的是什么？你总是想拿到单克隆吧，那么
1：你一般选择的DH5alpha, 等，不会吸收太多拷贝数了
2：也是最重要的，你干嘛将不同目的基因片段与质粒做连接啊？不是自找麻烦么，你买来的空质粒肯定是纯的，然后你自己PCR或者酶切得到的产物，也必须纯化过，是单一的片段才能去连接，然后再转质粒，再蓝白斑筛选。筛选出来的细菌，只可能含有一个或若干个相同质粒。再挑单克隆去测序，当然单一序列了。如果你吸收了不同目的基因的载体进入细菌，那你刚开始的PCR产物就不纯，导致质粒不纯，实验是彻底失败的，即使侥幸成功，也是不严谨科学的。

zjubell wrote:
哦，那你就选择单拷贝的载体。不要选择那种能转进多个质粒的载体。
不过现在还有多少人会用这种方法建文库啊？不如直接测序来的快啊

至于你说用通用引物鉴定发现是持本身序列，是否引物的特异性问题啊。
你应该先用通用引物先PCR，跑个胶看一下条带，然后再去测序。或者你的通用引物错了？
是先用通用引物先PCR的，跑胶条带大小也对，通用引物设计是基于质璃载体公布的序列，并且位置就是分布在克隆位点两边的。