酵母菌落直接质粒转化法
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酵母菌落直接质粒转化法
1. 用牙签从平板中挑取单菌落(直径 2 ~ 3mm ),转移到 1.5ml 的无菌离心管中。
2. 将 10 μ l 载体 DNA ( 100 μ g )与 10 μ l 转化质粒 DNA 混合,振荡均匀。(若转化 DNA 是用未经 RNA 酶处理的“ mini - prep DNA ”方法制得,则不需加载体 DNA )。
3. 加 0.5ml PLATE 溶液,振荡。
PLATE 溶液:
40 %聚乙二醇( PEG ,分子量 3350 ; Sigma P 3640 )
0.1mol/L 醋酸锂
10 mmol/L Tris-HCl ( pH7.5 )
1 mmol/L EDTA
4. 置于实验台上,室温培养 4 天。
5. 置 42 ℃下热激 15 分钟。
6. 以 8000 ~ 10000r/min 离心 10 秒沉淀细胞,小心弃去上清液,将细胞轻轻悬浮到 200 μ l 无菌蒸馏水,使细胞悬浮均匀,再直接将混合液涂选择平板。