酵母菌落直接质粒转化法

酵母菌落直接质粒转化法

 

1． 用牙签从平板中挑取单菌落（直径 2 ～ 3mm ），转移到 1.5ml 的无菌离心管中。

2． 将 10 μ l 载体 DNA （ 100 μ g ）与 10 μ l 转化质粒 DNA 混合，振荡均匀。（若转化 DNA 是用未经 RNA 酶处理的“ mini － prep DNA ”方法制得，则不需加载体 DNA ）。

3． 加 0.5ml PLATE 溶液，振荡。

PLATE 溶液：

40 ％聚乙二醇（ PEG ，分子量 3350 ； Sigma P 3640 ）

0.1mol/L 醋酸锂

10 mmol/L Tris-HCl （ pH7.5 ）

1 mmol/L EDTA

4． 置于实验台上，室温培养 4 天。

5． 置 42 ℃下热激 15 分钟。

6． 以 8000 ～ 10000r/min 离心 10 秒沉淀细胞，小心弃去上清液，将细胞轻轻悬浮到 200 μ l 无菌蒸馏水，使细胞悬浮均匀，再直接将混合液涂选择平板。