丁香清香
RNase H可以特异性地水解DNA-RNA杂合链中的RNA。当PCR实验RNA/DNA杂合体不能正常水解时,需要考虑使用
Eason老歌迷
RT-PCR引物设计和一般PCR引物设计可以遵循同样的原则。细心地进行引物设计是PCR中最重要的一步。理想的引物对只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火。
在PCR之前使用RNaseH处理cDNA合成反应可以提高灵敏度。对于某些模板,据认为cDNA合成反应中的RNA会阻止扩增产物的结合,在这种情况下,RNaseH处理可以增加灵敏度。一般当扩增较长的全长 cDNA目标模板时,RNaseH处理是必需的,比如低拷贝的。对这种困难模板,RNaseH的处理加强了或AMV合成的cDNA所产生的信号。对于多数 RT-PCR反应,RNaseH处理是可选的,因为95℃保温的PCR变性步骤一般会将RNA:DNA复合物中的RNA水解掉。
Guoood
RNase H是一种核酸内切酶,能够消化大部分RNA,在提质粒或gDNA时可以使用它来去除RNA影响。
天一湖医者
在一轮PCR中RNA/DNA杂合体不能正常变性时。
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