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科研学霸天团，48小时有问必答
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用NBS溴代苯环上的甲基需要反应多长时间，只要溴代上就行
天一湖医者
用NBS溴代苯环上的甲基一般反应时间为5小时。
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问
小鼠经氯化钙救治后反应
天一湖医者
氯化钙有强烈的刺激性，静脉注射时如漏出血管外，可引起组织坏死。静脉注射治疗剂量，不会有什么症状。只是疼痛。小鼠会叫起来、会反抗。
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问
hela细胞培养或转染后出现浑浊，放大可见小的颗粒。尝试加大二抗的量，加三抗等方法都没什么效果。求解答，谢谢~
天一湖医者
细菌污染一般培养2－3天后能看到培养液明显混浊，镜下也能看到密布的细菌颗粒，你这个看上去也有可能是支原体污染，可以在培养液里加环丙沙星试试，100ml培养液里加1mg环丙沙星。
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问
293T细胞出现如图线状物质，会随时间逐渐增多，影响细胞生长。求解决或者预防方法。谢谢
bamboopiggy
换好一点的血清试试，293t还是比较娇气的，血清不好，状态会差
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问
请问各位，国产的CD45磁珠去除白细胞有效果比较好的吗？
一个小哭包
在血液中捕获和富集CTC细胞的方法是利用CD45免疫磁珠结合表达CD45抗原的白细胞，进行磁分离去除白细胞，此法可将去除大部分表达CD45的淋巴细胞，并将全部类型的CTCs富集分选出来。但是剩余的白细胞包括粒细胞(CD15抗原)和单核细胞(CD14抗原)还存在，剩余的细胞中仅能获得0.01％～1％的CTCs。
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问
基因测序的标本如何保存
一个小哭包
1. 植物组织：植物组织一般要求重量大于 4g。首先我们要准备好液氮预冷的无酶管，并做好取样器械的消毒和去RNA酶处理，尽量选取新鲜幼嫩、生长旺盛部位的样本进行迅速采集，然后用RNase-free水对样品表面进行快速的清洗，吸干表面液体之后放入无酶管中液氮速冻（时间不要太短哦），待彻底冷冻后，转移至-80℃冰箱保存。2. 动物组织：送样的重量一般要求在 2g以上。若在实验室中取样，做好器械的消毒和
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问
his标签纯化目的蛋白跑胶呈现出拖尾的现象同一个胶其他样则不这样原因是什么呢？
bamboopiggy
感觉是你纯化蛋白上样浓度有点大，所以才出现了拖尾。
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问
成球实验培养的细胞球可以冻起来么
bamboopiggy
你最好把细胞球弄成单细胞悬液再冻起来，否则会损伤细胞球中间的细胞的。
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问
请问成球实验培养的时候需要一直摇么
bamboopiggy
sphere成球实验，不需要摇，但是需要用低吸附的培养板。，
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问
HD11细胞系很难活过60小时原因？
bamboopiggy
永生化的细胞系如果活不过60h，就要考虑培养条件的问题，HD11细胞系的培养条件：DMEM/F12培养基，90%；优质胎牛血清，10%。培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
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问
请问养细胞过程中受到真菌污染该怎么处理？
迟C迟
CO2孵箱被真菌污染后，可把所有细胞暂时转移，采用无气味杀孢子剂擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。并把杀孢子剂喷洒成雾状，使其蒸汽弥漫。待杀孢子剂的气雾消散后，再移入细胞。孵箱应定期清洁（2月左右），尤其在多雨的季节。其它培养箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外灯照。预防真菌污染，可在培养基里加3u/ml的两性霉素或制真菌素或放线菌素D或双抗；但细胞一旦污染，很难挽救，制真菌素或放
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问
转染时细胞总是死的太多，而且细胞状态不好，形态也发生了变化，请问你们转染时细胞铺板会铺多少细胞呢？可以根据类型提供一下参考嘛？
bamboopiggy
看你用哪种转染试剂，按照转染试剂说明书推荐剂量进行操作
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问
质粒过表达，CMV启动子转录起始位点是什么？细胞内转录出的mRNA有5'UTR吗？
天一湖医者
启动子一般位于转录起始位点的上游。启动子位于结构基因5'端上游的DNA序列，能活化RNA聚合酶，使之与模板DNA准确的结合并具有转录起始的特异性。
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问
人心肌细胞系都有哪些？怎么选择 人的心肌细胞怎么分离
天一湖医者
一类是普通的心肌细胞，包括心房肌和心室肌，含有丰富的肌原纤维，执行收缩功能，故又称为工作细胞。另一类是一些特殊分化了的心肌细胞，组成心脏的特殊传导系统；其中主要包括P细胞和浦肯野细胞，它们除了具有兴奋性和传导性之外，还具有自动产生节律性、兴奋的能力，故称为自律细胞，
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问
有哪些多重免疫组化技术平台？哪个比较常用？
天一湖医者
上海阿克曼医学检验所（阿克曼病理）佰诺全景分析技术平台等
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问
使用caspase 3/7检测细胞凋亡，为什么正常培养的细胞，荧光值也非常常高？
bamboopiggy
因为细胞状态可能会有自发荧光，你设好对照组，圈门就可以
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问
慢病毒文库感染后，多长时间第一次收取细胞，作为基线？
bamboopiggy
一般感染起作用要48-72h，你可以48h收第一次
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问
远志对小鼠的化痰作用实验中，为什么要严格控制给药到处死小鼠然后插气管的时间呀？
天一湖医者
因为灌胃给药时间过长会出现死亡或者身体消瘦、精神萎靡等症状。
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问
怎么判断细胞是否染菌
未来9
只能根据经验去判断，细胞内出现小泡越来越多，细胞间有黑点布朗运动，细胞崩解，生长受限。
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问
0.5%CMC-Na配置
bamboopiggy
1.充分搅拌 2，不行滴几滴乙醇（最好不加） 3，用脱脂棉垫在布氏漏斗上，抽滤，封口冷藏保存。
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