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科研学霸天团，48小时有问必答

问各位大侠求助，最近在做RT-LAMP实验，采用荧光的方法，但是阳性和空白都有荧光曲线，只是空白起峰晚一些，这是污染还是引物的问题

Eason老歌迷

如果阳性和空白都有荧光曲线，但是空白起峰晚一些，我感觉是引物的问题。

1 回答95 围观

问糖尿病实验中Y-氨基丁酸是第一个既能刺激细胞增生，还能避免细胞被免疫破坏的介质吗？

Eason老歌迷

是的。实验通过给小鼠注射了γ-氨基丁酸的物质，结果显示它可以让已经患上糖尿病的小白鼠的病情得到逆转，甚至达到临床治愈。实验还表明这种γ-氨基丁酸物质可以有效的预防糖尿病发生。国际最权威的糖尿病研究机构之一、发明胰岛素的实验室、多伦多大学班廷贝斯特糖尿病研究中心主席高度评价这项成果，他认为：“γ-氨基丁酸是第一个既能刺激β细胞增生，又能避免β细胞被免疫破坏的介质。”

2 回答87 围观

问蛋白纯化问题，换了不同载体，不同感受态，都表达不出目的蛋白

Eason老歌迷

感觉还是你的质粒没有构建好，你可以查查文献，看大家表达这个目的蛋白都用什么载体。

4 回答214 围观

问请教下，我的rt-lamp 实验的荧光图为什么是这样，用等温扩增仪做的，第一张是荧光图，第二张是熔解曲线图，有什么办法可以解决啊

Eason老歌迷

你看看是不是溶液浓度太浓了，感觉有点像自蚀。

1 回答103 围观

问求助，荧光酶标仪检测ROS活性氧，空白对照的OD值反而更高是什么原因

Eason老歌迷

是不是酶标仪没有调好?你的目测结果与酶标仪读值是否对的上，也可能使酶标仪设定参数不合适。

3 回答537 围观

问细胞加药处理，发现药物作用窗很窄，药物加4小时，发现细胞碎了，还有必要做机制吗

Eason老歌迷

没必要吧。首先药物作用窗很窄，而且药物加4小时，细胞就死了。你这样后面实验很难开展。

3 回答96 围观

问请问无血清培养基中本身含有酪蛋白吗？无血清培养成分中的氨基酸能够直接合成酪蛋白供细胞所需还是细胞利用无血清中的氨基酸合成酪蛋白？

Eason老歌迷

无血清培养基中本身不含有酪蛋白。细胞利用无血清中的氨基酸合成酪蛋白。

3 回答64 围观

问请问人Tp53和鼠Tp53的同源性如何？

冷泉港蛋白

上图是在线数据库Uniprot的比对结果，小鼠蛋白和人蛋白的序列同源性，本就很高。要看你的实验目的，如果你要用抗体区分两个蛋白，就只能用同源性最低的那段序列了。如何进行氨基酸比对：A.在线数据库，如uniprot,NCBI等。B.序列比对软件 DNAman,bioxm等

3 回答59 围观

问小鼠骨髓染色体畸变，出问题了，求助啊

大草原的小灰驴

可能是染色体制备后，在滴片步骤时候没有掌握好合适的环境温湿度，采用的冰片还是冰水片或分散仪，滴片后是否过火等操作细节问题。另外再检查一下培养过程的环境等条件控制，试剂和培养基是否失效。

2 回答90 围观

问pi染色细菌在荧光显微镜观察问题

Eason老歌迷

用多聚甲醛固定，细胞培养好了，要染色前固定就行。

1 回答217 围观

问sw620细胞形态哪一个是正确的

Eason老歌迷

第二张图，我看着第二张图更好些。

3 回答213 围观

问抗体是永久有效的吗？还是有一个有效期，然后是有有效期的话，那有效期是多久呢？

天一湖医者

抗体是不是永久有效的，每个有效期都不一样，具体要看抗体类型。

4 回答175 围观

问免疫组化的问题求助下？

Eason老歌迷

在指标与染料的搭配以及染色顺序上，没有什么特定规律。抗体修复液每一轮修复都要更换。

3 回答62 围观

问流式凋亡检测细胞不分群

Eason老歌迷

如果细胞不分群有两种可能，一是试剂的问题；二是细胞本身的原因，比如贴壁细胞在消化过程中产生损伤，导致非特异性染色，使得分群不明显。

1 回答203 围观

问求流式检测胞内抗原时打孔液的配方？

你好几和户

加⼊10%Triton X 100，（破膜⽤）；加⼊1 mmol/L氯化钙，（问题所在），吹打均匀，孵育1~10min，测定荧光即Fmax值。

4 回答120 围观

问请教一下DMSO诱导HL60成中性粒细胞时，HL60每毫升细胞数多少合适呀

Eason老歌迷

一般HL60每毫升细胞数为1-2x10的六次方。这篇文献”DMSO诱导HL60转化为类中性粒细胞的实验研究”，讲的很详细。

3 回答116 围观

问HL60诱导中性粒后用病毒转染

Eason老歌迷

可能是你的病毒浓度太高，毒力对细胞生长有影响。

1 回答66 围观

问流式单标是否需要固定和封闭

bamboopiggy

如果染pi或膜内是需要固定的，你做膜表面不用固定，但是还是要封闭一下的。

3 回答889 围观

问牙髓干细胞转染

Eason老歌迷

细胞转染实验的终浓度建议采用50-100nM，浓度过高导致细胞毒性。对于21 bp的siRNA oligo，有如下简单关系：2OD＝6.0nmol＝80μg。一般购买2OD包装的siRNA，可以采用DEPC水配成母液后使用前稀释，对于24孔板终浓度100nM可以使用50次。

2 回答105 围观

问海藻酸钠微球的用途有哪些？

你好几和户

海藻酸钠微球可做血管栓塞剂。通过介入栓塞靶器官血管（物理性/机械性封堵），治疗各种实体肿瘤的“KMG 及其系列载药 KMG”，涉及的临床介入治疗领域包括：中晚期肝癌、肺癌、肺结核、肺咯血、肾癌、妇产科良、恶性肿瘤、产后大出血、血管瘤、甲亢和脾亢减能、外科器官移植手术的术前栓塞等多方位多学科的临床治疗领域。

3 回答193 围观

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