lizzi 基因组dna文库和cdna文库在构建原理和用途上的主要区别是什么zhujoker cDNA文库以mRNA为模板，经反转录酶催化，在体外反转录成cDNA，与适当的载体常用噬菌体或质粒载体连接后转化受体菌，则每个细菌含有一段cDNA，并能繁殖扩增，这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织细胞的cDNA文库。基因组含有的基因在特定的组织细胞中只有一部分表达，而且处在不同环境条件、不同分化时 ...
cdongni 我测蛋白质用的是Bradford法，实验室的酶标仪只有570nm 没有595，请问大家，用570测稳定吗？准确吗？我现在的R2只能到96！zhujoker 这个问题你只能问公司了？最好还是找一个595nm测吸光度的。但是做流失时像这种差距还是能做的，但是不知道是不是也适合测蛋白？dlzhangyu 可以的。以下是来自碧云天的说明书：使用说明：1. 完全溶解蛋白标准品，取10μl稀释至100μl，使终浓度为0.5mg/m ...
liuying6477 想做mirna的抑制和过表达，请问1.过表达是否直接转ssc-let-7c MI0002445 stem-loopUGUGUGCAUCCGGGUUGAGGUAGUAGGUUGUAUGGUUUAGAGUUACACCGUGGGAGUUAACUGUACAACCUUCUAGCUUUCCUUGGAGCACACU2.抑制表达是否是上个stem-loop序列的反义还是ssc-let-7c MIMAT000215 ...
galaxyzj 我有一个真核表达载体，包含一个Iba1启动子，来源于巨噬细胞的特异性基因Iba1，因此是个组织特异性的启动子，用来控制GFP的表达。启动子的结构见图1，其中加框部分是外显子序列。载体的结构见图2。载体的构建人说，这个载体的开放阅读框起始是Iba1基因自身的ATG，也就是图1里面Exon1内部加了下划红线ATG，GFP的起始密码ATG也是在一个读码框内。因此，这个载体最后表达GFP蛋白，并且N端融合 ...
redsky 我在mirbase查到hsa-mir-34a的序列如下：hsa-mir-34a MI0000268GGCCAGCUGUGAGUGUUUCUUUGGCAGUGUCUUAGCUGGUUGUUGUGAGCAAUAGUAAGGAAGCAAUCAGCAAGUAUACUGCCCUAGAAGUGCUGCACGUUGUGGGGCCC我在ensemble查hsa-mir-34a序列及其上游(5'端）10bp序列变成如下 ...
shuaibo2008 新手请教各位高手，我准备做AngII的相关实验，不知道如何分装保存，是买来的全都-20°C分装保存，还是先称取一部分分装，如果是称取部分的话，能用0.22um的滤器滤过吗？说明书很不详细啊。期待帮助哦，太感谢了zhujoker 你一部分分装也是分，还不如全分装。只要分装无菌完全可以不过滤的。侠骨仁医 如果不是在短期内使用的话，我建议你分装粉末，而不要溶解，因为溶解稀释后，浓度相对较低比较容易降解；如果万一 ...
lsdcfhyj 组成型的stat3的磷酸化是指先由基因先表达出stat3蛋白，再由细胞内的磷酸激酶使stat3磷酸化，还是细胞本身就能直接表达出磷酸化的stat3？谢谢bigbang_0_0 是前者，是条件非依赖的，一表达，就被磷酸化。是不受诱导的磷酸化。且不被去磷酸化。lsdcfhyj 谢谢你的回答，你的意思是细胞中的磷酸酶也不能使其去磷酸化吗？bigbang_0_0 lsdcfhyj wrote:谢谢你的回答，你的意思是细胞中 ...
ybcz1974 本人刚刚涉及分子生物学领域，可能说得很不转业，请勿见笑！最近想做一种非整数倍染色体病的研究，有几个问题想请教大家：1、如果这种疾病是由于某一条染色体多一条引起，除了基因（DNA）数量上的改变，会不会出现基因组的差异，例如出现新的基因？或者基因突变？2、通过患者与对照血清基因筛选是否有意义？有没有可能发现基因表达差异？如何进行基因筛选？3、每条染色体都表达数百种基因，通过何种方法可以找到某条染色体特异性 ...
JaneyJuan 请教各位大侠：我现在手上有一个真菌的ITS序列，请问怎样标示其中的ITS1、5.8S rDNA、ITS2和18S rDNA区域？急~~~请高手帮忙！非常感谢~~freecell 你是不知道用什么软件在已知的ITS上去标示这些区域，还是不知道“ITS1、5.8S rDNA、ITS2和18S rDNA区域”在你手头ITS上的具体位置，想知道怎么样找到这些区域在ITS上的位置？JaneyJuan freecell wrote:你是不知 ...
霍一刀hxs 各位高手，有没有专业的网站，可以根据一段cDNA序列，预测一下它的UTR区的序列？多谢。freecell http://171.66.122.45/content/15/5/742.fullor tryhttp://www.google.com/#hl=en&source=hp&q=+utr+prediction&aq=f&aqi=g-m1&aql=&oq=&gs_rfai=&fp=bcdf8cbbf06dc4f霍一刀hxs 谢谢freece ...
luowen__ 各位前辈：小弟是刚开始做实验的研究生，老板要我检测组织中的BCL-2，Bax和caspase-3的表达。但是检测方法却没有具体说明。我想请教各位前辈有没有做过以上三种因子的检测，是用WB、RT-PCR检测，还是买专门的试剂盒检测，或者还有其他的方法？另外，什么方法检测比较便宜（我老板的经费不多）？小弟在这里先谢谢了！magichunter （1）经典的方法还是做WB，当然抗体比较费钱。（2）有专门测定caspa ...
summityoung 请问大家，用最普通的HEK293细胞能包装慢病毒码？谢谢freecell 从文献上看，已经有多篇文献报道了用HEK293来包装细胞。但是包装的效果可能没有其它293衍生细胞好。例如293FT来源于293细胞，293FT和293T细胞一样，都是转化了SV40大T抗原的293细胞的一个衍生物。这些细胞系具适宜的包膜和高表达反转录酶，能提高逆转录病毒的滴度。与293T细胞相比，293FT生长的更快， ...
s78293 求教各位老师：A基因被RNA干扰之后，B基因表达亦下调，说明A和B关系如何？或能提示其他什么？freecell 理论上说明B的mRNA水平直接受A调控。侠骨仁医 我个人觉得只能说明B基因可能和A基因有相关性，但是只通过简单的检测不能说明两者是直接关系还是间接关系，有可能是A基因直接作用于B基因，当然也可能A基因是通过C，D，E。。。等间接作用于B基因。lbqlxy 新手不理解二楼说的直接调控的意思是社么1 A蛋白直接 ...
coco0663 P53NM_000546.4Transcript Variant: This variant (1) is a dominant transcript and encodes isoform a.麻烦高手看下，这是野生型P53还是突变型P53？Transcript Variant是否突变型的意思，那么NM_000546.4 所转录的是否就是突变型的P53？谢谢侠骨仁医 Transcript Variant的意思是变异体的意思，应该不是突变的意思，看了一下，人类 ...
longytu NCBI上面查到了BAX的mRNA的几种序列，有αβγ三种类型。。。。为什么BAX基因序列相同，且都是人源的，mRNA为什么序列不同呢？？zjubell 大多数真核基因转录产生的mRNA前体是按一种方式剪接产生出一种mRNA，因而只产生一种蛋白质。但有些基因产生的mRNA前体可按不同的方式剪接，产生出两种或更多种mRNA，即可变剪接（alternative splicing）。人们发现，越是高等的动物，涉及mR ...
longytu 将两种荧光蛋白质粒导入细胞，观察FRET信号，怎么样给相互作用的两种蛋白定量？应该从哪个角度着手，荧光强弱，表达浓度？大家有没有更好的方法来活体细胞内定量蛋白质？版主freecell留言:自己提出解决问题的方法，然后请别人点评，这才叫“讨论”。你这个帖子纯粹就是求助，何故冠以“讨论”之名？freecell 质粒转染细胞后，可以通过流式或者WB，对蛋白进行粗略的相对定量。longytu 谢版主的回复。。。除了流式和WB ...
lily1218 请问哪位做过关于MTDH的干涉,求助能发挥干涉作用的siRNA序列,十分感谢!freecell 自己在文献里面找，或者dharmacon或者ambion的库里面找。majian0064 5 CAGAAGAAGAAGAACCGGA 3 可以交流一下你的实验吗？我的邮箱majian10@mails.jlu.edu.cn本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙 ...
xuchenmail 最近看了一篇文献，关于PIK3CA 基因突变的问题，文献说热突变位点在exon 9 (E542K,E545K) and exon 20 (H1047R)，但是我根据pubmed上的数据，H1047R已经在21号外显子了，这是怎么回事啊？是文献错了吗？还是有其他的原因？zjubell 1.这篇文献是什么时候发表的？对序列更新也是很正常的事。另外，这篇文献IF是多少？2.是否存在可变剪接，他的突变株，是否是其他的剪接体的外显子中的？3 ...
xuyq706 近年逐渐发现非编码序列突变在人类遗传病中发挥重要作用，此类序列突变如何致病？对其致病性如何研究判定？freecell 这些都是医学遗传学上的内容。建议楼主留意一下教材和中文综述。shilei5794749 In the human genome , variations of non-coding seqences including 5’UTRs，3’UTRs，promoters，introns ，long-rang cis-control elemen ...
mnidr 我想做拟南芥基因和烟草基因的NORTHERN，想选择β-actin作为内参，请问，在拟南芥和烟草中β-actin的序列是一样的吗？如果在更远的物种里呢，比如动物？？？？freecell 脊椎动物中不同物种的β-actin基因氨基酸之间的序列同源性超过98%。其它种属不清楚，你可以在NCBI里面blast一下。sherwing2009 可以在NCBI中，blast一下，相似性应该很高detector350 有一定相似度， ...
