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【求助】为避免脱靶效应 所设计的待筛选的3个siRundefined*段 能否组合成pool转染?

lbqlxy 我的目的基因是 人 rab23 约2000bp请公司设计了3个siRundefined*段 位置分别在200 600 800处 本打算用来筛选出一个干涉效果好的片段在复习文献中发现 单个片段可能因为脱靶效应 影响实验准确性现在的问题是 能否用我现有的3个片段 组合成pool(三者各取三分之一的量组成一份)转染细胞?? 有无组合的原则??lmnsmu 一般不这样做。单个片段可能因为脱靶效应而无干扰作用,所以才设计数个片段,通过预实验检测它们哪一个干涉效果好,再用于 ...

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【求助】RNA两端是不是有一段“可变区”呢??在这里可以设计引物吗??

mnidr 我现在要做一个有9个基因的基因家族的northern杂交,看一下这些基因的表达情况。需要设计cDNA的引物去P出一段500bp左右的片段来进行探针标记,但是这9个基因的同源性太高了,只能在cDNA序列的两端找到一些非保守的区域,但是实验室的一个师兄说,cDNA两端是不能设计引物的,因为RNA的两端是“可变区”在这些可变区设计引物,做PCR可能会出不来结果,就是说网上查到的RNA序列两端的几十个碱基是 ...

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【求助】大鼠SB203580的用量及途径

徐州往事 我想做大鼠的p38MAPK的试验,需要用到SB203580干预,请问在大鼠中,SB203580的给药途径和剂量,最好能提供相关文献。谢谢piaopiao5556 彼此彼此 ,我也做这个的 各个文献用量不一样,尤其关于大鼠的很少,看到一篇要用到50mg/kg。实验1小时前给药,哪来这么多钱啊?624980241 侧脑室 给药的量是 多少啊 ?ldmin 貌似从1mg/kg——10mg/kg都有人在用。。。大鼠。。。。我也在查,,我打算用1mg/kg ...

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【讨论】DNA methylomes的研究方法

dnazyme 每个领域都有独特的研究方法,理解其方法的优缺点特别关键,大家是否对甲基化组(甲基化谱)感兴趣?列举了一些能够通过PubMed搜到的代表性论文。Profiling DNA methylomes from microarray to genome-scale sequencing.生物芯片的方法。DNA methylome of familial breast cancer identifies distinct profiles defined by mutation ...

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【求助】检测某一特定RNA在细胞所在位置的方法

霍一刀hxs 各位高手:对于某一特定的RNA,通过何种方法判断其所在细胞内的位置?多谢。zoeru2007 原位杂交吧。。。sbch1532 霍一刀hxs wrote:各位高手:对于某一特定的RNA,通过何种方法判断其所在细胞内的位置?多谢。原位杂交可以霍一刀hxs 多谢zoeru2007和sbch1532的帮助。呵呵hyjtb 免疫荧光能看出来么?霍一刀hxs hyjtb wrote:免疫荧光能看出来么?试试此方法,谢谢。bigbang_0_0 hy ...

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【求助】雷帕霉素处理后细胞的奇怪现象

lifengna 各位战友,最近在做雷帕霉素对mTOR通路的抑制试验,培养的是C2C12细胞,在分化阶段进行干预,其中一组单独添加50 um/L雷帕霉素,奇怪的是不仅没有抑制C2C12的分化,反而比空白组更好,这是怎么回事呢?排除实验操作中的问题。谢谢大侠出手相救!zhm1212 你做雷帕霉素50 um/L,这个浓度难道不高吗?有报道称全血中雷帕霉素安全有效的浓度窗为5.5~16.4 nmol/Lbubu88 你是用的哪个公司的雷帕霉素? ...

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【求助】绿色荧光小鼠荧光

tang1227 绿色荧光转基因小鼠的皮肤移植到普通小鼠身上N天后,肉眼看到皮肤明明还在,但是荧光显微镜下却看不到荧光,这是为什么?是不是荧光会自身淬灭?还是有其他原因?zjubell GFP小鼠荧光很强的,见附件,我这只是全身表达GFP的。在UV下照,裸露的皮肤都能看到荧光。怀疑你的皮肤已经坏死了,那不表达这个蛋白了,自然就没荧光了。bigbang_0_0 zjubell wrote:你的皮肤已经坏死了纠正一下,是你的小鼠的皮肤 ...

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【求助】LY294002:PI3K/AKT阻断剂的问题

forevercan 想请教下园子里的各位xdjm们一个问题,那就是LY294002:PI3K/AKT阻断剂的问题,LY294002是PI3K通路的阻断剂,他到底是阻断了PI3K的蛋白表达,也就是说使PI3K的蛋白得表达下降了;还是阻断了PI3K蛋白的磷酸化,说明书只是说体外培养的细胞加入该阻断剂后,可以抑制AKT的磷酸化,但是对PI3K的蛋白及其磷酸化PI3K蛋白的改变未提及。请指教。forevercan 自己顶一 ...

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【求助】微生物中recA基因编码的是什么酶?

lwq652 微生物中recA基因编码的是什么酶?他有什么作用,他与限制修饰系统有何联系?对他敲除有何用处?bigbang_0_0 DNA重组,敲除以后就不能重组了,质粒在里面就自由了。lwq652 bigbang_0_0 wrote:质粒在里面就自由了。质粒不会被宿主里面限制性酶酶切掉吗?bigbang_0_0 lwq652 wrote:质粒不会被宿主里面限制性酶酶切掉吗?这个跟RecA的功能没有关系,质粒要保持稳定,除了要敲除感受态细胞 ...

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【求助】microRNA粗筛

gzlaotouzi 我想知道,经过芯片或者其它手段确认了的,与某一类肿瘤或者某一特定疾病相关的所有差异表达有意义的microRNA群,我可以借助哪些手段得知?shilei5794749 http://www.mir2disease.org/ —— “search by disease name”路得自己走 shilei5794749 wrote:http://www.mir2disease.org/ —— “search by disease name”这个不错!shen ...

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【求助】已经知道某个基因序列的一部分,如何得知其全长基因序列?

霍一刀hxs 各位高手,已经知道某个基因序列的一部分,如何得知其全长基因序列?首先,该序列只有mRNA序列可知。有没有专业的网站,可以根据一段cDNA序列,预测一下它的UTR区的序列?多谢。freecell RACE霍一刀hxs 谢谢freecell.霍一刀hxs BLAT Search Genome呵呵zjubell 看你是什么物种了,如果完全是未知物种,那建议全基因组测序好了,如果是细菌的基因组,整个测下来也就1万块钱左右。拿到序列后 ...

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做STAT3及pSTAT3的WB如何提蛋白?

Rachel1123 求助各位高手,RIPA裂解液提取的蛋白可以用于做STAT3的wb吗?还是需要专门提取核蛋白?多谢!顺便再问一句,stat3在胃癌细胞SGC7901中是否高表达?wangfanyun RIPA裂解液可以做stat3的WB。不需要专门提取核蛋白!zfyyzz00 一般来说,stat是转录因子,只有磷酸化的stat才有活性,它通过形成二聚体的形式进入细胞核内,和相关靶基因结合,启动靶基因转录,因此一般情况下 ...

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【求助】求问DNA单链的长度,

longyu2728 请问DNA单链的长度,eg,含30个碱基的DNA链的长度,是纳米级,还是埃级,如何计算,每个碱基大约多长呢?不胜感激!freecell one bp corresponds to circa 3.4 Å of length along the strand.longyu2728 freecell wrote:one bp corresponds to circa 3.4 Å of length along the strand.Thank you!本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前 ...

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【求助】体内转染哪个方法更好

brainpower 对大鼠进行体内转染,Muramatsu等报道在材料一致的情况下,电穿孔法的基因导入和表达效率明显高于其它方法,且适用于多种组织的操作。可是现在又不提倡电穿孔法了。因为实验经费的问题,我又不能去将一些转染方法进行对比。求助体内转染哪个方法转染效率更高?freecell 体外转染取决于细胞系,体内转染取决于组织和转染分子,不能一概论之。brainpower 谢谢你的解答。我是想转染到大鼠的腓肠肌上。那么 ...

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【求助】如何获得未知miRNA的表达情况呢

Y03013 请问XDJM,如何获得未知miRNA 的表的情况呢freecell 现在比较流行的做法是进行deep sequencing。权威的miRNA公共数据库Sanger miRBase已升级至最新的13.0版,发布的microRNA序列信息已接近10000条。由于越来越多的miRNA正在被发现,miRBase数据库每隔4~5个月就会发布新的数据版本。尽管如此,我们仍然对大量的物种miRNA信息一无所知,它们的重要生物学 ...

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【讨论】miRNA功能蛋白研究

太峰之巅 目前,对小RNA的研究进展的相当迅速,小RNA的功能蛋白如Ago,Dicer等也有相当的研究。就对小RNA新的功能作用蛋白大研究方法,高手进来畅聊。版主freecell留言:你所知道的有哪些方法?只有先提出自己的见解,才能抛砖引玉,引来更多的讨论。freecell see this post:http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=154&id=16504126&sty=1&tpg=1&age=0太峰 ...

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【求助】mRNA的表达量是升高的,能否说明那它的蛋白质的表达量也是升高的呢?

深空明月 大侠同志们:请教一下PCR检测出mRNA的表达量是升高的,能否说明那它的蛋白质的表达量也是升高的呢?如果蛋白质量是升高的,那它的机理是什么样的?如果不一定是升高的,其缘由又是什么样的啊?还有一个问题:受体分子在细胞中是有限的,当受体处于饱和状态时,受体mRNA的表达量会是什么情况呢?关于分子机制这方面的我不是很明白,请赐教。急freecell mRNA表达量升高,不一定会说明蛋白质表达量升高。这是因为在翻译过 ...

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【求助】诱导凋亡后细胞如何收集与处理

einstan001 最近本人正在做缺氧复氧诱导细胞凋亡实验,实验对象为贴壁细胞,诱导完凋亡后须收集细胞提RNA和蛋白并检测一些凋亡相关酶的活性与表达,在缺氧复氧后出现大量漂浮变圆的细胞,由于我采用采用胰酶消化的方法收集细胞后提RNA和蛋白,由于消化前需将原培基倾倒掉并用PBS洗涤细胞,因此这些漂起来变圆的细胞大量丢失,请问这些漂浮变圆的细胞我需要收集吗?这些细胞的丢失对我的实验结果影响大吗?谢谢hggjoy 需 ...

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【求助】换一种动物模型算不算创新?

jchent 有意研究wnt信号通路,但是生手不知如何下手。看到一篇文献做的是鸟的wnt相关基因表达,我想换一种动物模型,比如将鸟换成小鼠,将来可以比较二者的不同。不确定这是否可算作是科研创新?意义大吗?非常感谢!!qingguyouquan 我认为不算科研创新,是跟在别人后面走而已。不过也可以了,如果结果好的话毕业时没问题的。严格意义上的创新基本上是别人没怎么做或者没怎么涉及的,而你从另一个角度独辟蹊径,取得了一定成果 ...

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【求助】Fn实验中用的Fn是什么型号的?哪家公司的比较好

cathrynyy 请问各位大侠:我想做Fn铺板的细胞粘附实验,可是查了半天,发现有好多种,究竟用哪种型号的?哪家公司又便宜,又好用呢?谢谢!freecell Fn=纤维连接蛋白 ?究竟哪种好用,取决于所在实验室条件。同样的东西,在不同的实验室有不同的结果。一般用这个: Fibronectin, bovine plasma (Sigma, cat. no. F1141)cathrynyy 谢谢!可是我做的是人的肿瘤细胞,得用人源的吧?bovine plasma可以么 ...

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