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【求助】观察细胞内的荧光蛋白,怎么样定量?

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将两种荧光蛋白质粒导入细胞,观察FRET信号,怎么样给相互作用的两种蛋白定量?应该从哪个角度着手,荧光强弱,表达浓度?
大家有没有更好的方法来活体细胞内定量蛋白质?
版主freecell留言:
自己提出解决问题的方法,然后请别人点评,这才叫“讨论”。你这个帖子纯粹就是求助,何故冠以“讨论”之名?
质粒转染细胞后,可以通过流式或者WB,对蛋白进行粗略的相对定量。
谢版主的回复。。。除了流式和WB,还有没有其他的方法啊??比较精确的定量一下。。。。
ELISA 吧
楼主,你这种fret信号是怎样产生的?可否告知你用的什么质粒?
可以在在荧光显微镜下随机拍摄多个视野的照片后,利用相关的软件进行定量处理,比如Image-Pro Plus 或者Imagin J等,应该都是可以达到目的的。
现在有GFP荧光定量试剂盒了,GFP Quantitative Kit,效果不错的。通过消除细胞的自身荧光,进一步定量分析GFP信号。现传其说明书一份,可以看看,会有帮助的。

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师兄微信号:shixiongcoming

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