求助，半定量PCR的问题

半定量PCR是首先通过确定目标物PCR有限扩增至最大值的最低循环数，进而比较不同样品之间该目标物的PCR扩增产物数量，以此确定样品中目标物的相对数量。也就是说是一个相对值，不是绝对含量。至于第二个问题，完全一样的操作，并不代表完全一样的模版都加进去了，每加一次样，都可能存在误差，甚至没有吸到液体。

半定量是RT-PCR做基因表达分析的一种方法，其操作的方法是在野生型和突变体中用一个看家基因（通常是actin）做参照标准来观察目标基因在各自的表达情况（上调还是下调），所谓半定量的“半”是通俗的说法，即在看电泳图估计参照亮度一致（可看作是表达的细胞数一致）情况下，确定目标基因的表达；这是与更加精确的Q-PCR的相对定量和绝对定量的区分。半定量PCR，是指从传统的PCR定性分析方法基础上发展起来、能够测定目标产物相对数量的PCR技术。

半定量PCR是首先通过确定目标物PCR有限扩增至最大值的最低循环数，进而比较不同样品之间该目标物的PCR扩增产物数量，以此确定样品中目标物的相对数量。这种PCR是到达平台期后进行检测，重现性差。由此获得的定量准确度有限，因此，只用于粗略地估计目标基因表达水平的研究。

半定量分析是准确性比定量分析稍差的分析方法，特点是简单、迅速、费用低。 半定量是pCR做基因表达分析的一种方法，是在野生型和突变体中用一个actin做内参，来看看目标基因的表达

半定量是指并非完全按数值的方式进行组之间的量比较，而是将他们的电泳条带进行扫描以后根据灰度值进行比较，半定量的前提必须是必须要有一个内对照，就是说这个对照在一般条件下不会因为突变、疾病或其他异常而表达发生变化，先与自身对照比较后的相对值在与其他的同样方法得到的相对值之间进行比较。
一般Actin都会跑出来，他的退火温度范围很宽，跑不出来的原因首先模板是否成功；其次体系里是否少加东西了。