【求助】关于连续观察细胞内钙离子的方法
丁香园论坛
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我的研究课题需要动态观察细胞内钙离子浓度，大概每隔10秒观察一次，想跟大虾们请教下怎么样能解决连续观察时温度的恒定问题，因为试了好多次都不行，谢谢
您要观察多久？几分钟？几小时？
用Fluo-4的Flexstation 或 Flipr （Molecular Devices公司）可以实时检测细胞钙流（比如加药后），可以控制温度、湿度，但是读出来的荧光信号，没有图像，而且细胞检测后就废了。
显微镜观察的话，用一些钙染料应该也可以吧，有一些荧光显微镜操作平台是可以保温操作的（比如一些做胚胎注射的），加一个保温hood，开上每隔10s的连拍，就可以去happy了。
关键看你要做什么，极端点的话开37度的空调，用37度的水浴回流都可以啊.
用Fluo-4的Flexstation 或 Flipr （Molecular Devices公司）可以实时检测细胞钙流（比如加药后），可以控制温度、湿度，但是读出来的荧光信号，没有图像，而且细胞检测后就废了。
显微镜观察的话，用一些钙染料应该也可以吧，有一些荧光显微镜操作平台是可以保温操作的（比如一些做胚胎注射的），加一个保温hood，开上每隔10s的连拍，就可以去happy了。
关键看你要做什么，极端点的话开37度的空调，用37度的水浴回流都可以啊.
DarrenWONG wrote:
您要观察多久？几分钟？几小时？
用Fluo-4的Flexstation 或 Flipr （Molecular Devices公司）可以实时检测细胞钙流（比如加药后），可以控制温度、湿度，但是读出来的荧光信号，没有图像，而且细胞检测后就废了。
显微镜观察的话，用一些钙染料应该也可以吧，有一些荧光显微镜操作平台是可以保温操作的（比如一些做胚胎注射的），加一个保温hood，开上每隔10s的连拍，就可以去happy了。
关键看你要做什么，极端点的话开37度的空调，用37度的水浴回流都可以啊.
我要观察20分钟左右，用的是fluo-3，因为一直找不到好的措施，所以实验情况总不太稳定。谢谢您给的建议
胞内Ca2+浓度测定:利用Fura-2荧光技术精确测定细胞内钙离子水平。胞内Ca2+浓度=Kd
(F-Fmin) /(Fmax-F)×R;其中,Kd为Fura22与
Ca2+反应的解离常数,常温下其值为224 nmol/L;F
为实验观察到的荧光比值,Fmax是Fura22全部为
Ca2+饱和时的荧光比值,Fmin由通过加入过量的钙
螯合剂将钙螯合出来获得。R为380 nm处无Ca2+
和Ca2+饱和时荧光强度的比值。
(F-Fmin) /(Fmax-F)×R;其中,Kd为Fura22与
Ca2+反应的解离常数,常温下其值为224 nmol/L;F
为实验观察到的荧光比值,Fmax是Fura22全部为
Ca2+饱和时的荧光比值,Fmin由通过加入过量的钙
螯合剂将钙螯合出来获得。R为380 nm处无Ca2+
和Ca2+饱和时荧光强度的比值。
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