钙离子细胞化学具体方法

1. 组织切成约 1 mm³ 的小块，用 0.09 mol/L 磷酸钾（或草酸钾）-3％ 戊二醛（pH 7.3，用 0.1％～1％ KOH 调 pH）固定 4 h 以上，4℃。也有人推荐固定早期用微波照射，以加速固定液渗入细胞内部（关于微波照射使用情况参见有关章节）。

2. 固定后用 0.09 mol/L磷酸钾（或草酸钾）-4％ 蔗糖（pH 7.3）漂洗2～4 h，换液3 次。

3. 1.5％～2％ 焦锑酸钾-1％ 锇酸4℃ 固定 2 h。

4. pH 10 的蒸馏水漂洗 3 次×10 min，以洗尽残留的焦锑酸盐。

5. 脱水、包埋同常规，切片，染色或不染色。

6. 电镜观察。

1. 焦锑酸钾常温溶解很慢，加热至 90～100℃ 则可很快溶解。

2. 应用磷酸钾或草酸钾结果并不完全相同。一般心、肝、肾、脑等组织、血细胞及培养细胞都可以用。

3. 焦锑酸盐还能与钠、镁等离子反应，形成沉淀，因此需控制实验条件，使焦锑酸盐主要与钙反应，少或不与钠、镁反应，用 1.5％～2％ 焦锑酸钾 4℃ 反应较为合适（在此反应条件下的实验进行 EDX 能谱分析，结果表明沉淀中不含或极少含钠、镁）。

4. 焦锑酸钾渗透到细胞内速度很慢，如果组织用灌注固定，再用振荡切片机切成薄片，效果较好。

5. 细胞内有离子钙及结合钙，并且二者可以相互转换。从理论上讲，与磷酸盐（草酸盐）-焦锑酸盐反应的应为离子钙，但实际情况可能并非完全如此，部分结合得不是很牢固的结合钙也可能与磷酸盐（草酸盐）-焦锑酸盐反应形成沉淀。

6. 切片后染色，常规观察，可同一般染色。如果要做能谱分析，则不染色，必要时可在锇酸固定后再用 1％ 锇酸 2％ 亚铁氟化钾固定，以提高反差。