【求助】绿色荧光蛋白转染问题
丁香园论坛
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最近使用pEGFP(增强型绿色荧光蛋白基因)做的转染，虽然转染细胞阳性率不低，但是绿色荧光蛋白表达跟以前相比较很少（转染剂量是一样的）。最初怀疑是细胞状态问题，重新复苏细胞后，没有改善；后将Hela细胞换为HepG 2细胞后，结果仍然不理想。我怀疑是不是我们的质粒突变了呢，就是转录或者是表达蛋白的能力下降。因为有一批提的质粒做的转染根本没有表达。请大虾们给支支招哈！
liufengxi wrote:
最近使用pEGFP(增强型绿色荧光蛋白基因)做的转染，虽然转染细胞阳性率不低，但是绿色荧光蛋白表达跟以前相比较很少（转染剂量是一样的）。最初怀疑是细胞状态问题，重新复苏细胞后，没有改善；后将Hela细胞换为HepG 2细胞后，结果仍然不理想。我怀疑是不是我们的质粒突变了呢，就是转录或者是表达蛋白的能力下降。因为有一批提的质粒做的转染根本没有表达。请大虾们给支支招哈！
你们用的是什么转染试剂？
如果前后实验用的相同的转染试剂，并且转的质粒也是同一种质粒的话，那么问题很可能在于你提的质粒质量上，细胞转染对于质粒的质量要求比分子要高很多，参数要正常，质粒的浓度也不能太低，还有对于某些细胞最好是去内毒素的。HeLa细胞总体还是属于比较好转染的类型的。
选择合适的转染试剂，应该能解决你现在的问题
对hela，建议选择PolyFect Transfection Reagent（qiagen），效果不错
另附上一份资料，看完就明白了
对hela，建议选择PolyFect Transfection Reagent（qiagen），效果不错
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谢谢！
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