材料与仪器
真核细胞
完全培养液 TE BES
培养箱 平板
完全培养液 TE BES
培养箱 平板
步骤
1. 转染前一天接种呈指数生长的细胞，密度为5×105/10 cm 平板。加10 ml 完全培养液，在开始转染时细胞数应＜106/平板，以留足够供细胞扩增至少2倍的表面积。
2. 用TE缓冲液稀释质粒DNA至1 μg/μl ，4 ℃保存。
2. 用TE缓冲液稀释质粒DNA至1 μg/μl ，4 ℃保存。
3. 将最适量的质粒DNA与500 μl 0.25 mol/l CaCl2混合，加入500 μl 2×BBS中，混匀，室温下温育10~20 min。
4. 将磷酸钙-DNA溶液逐滴加入培养皿的细胞中，同时晃动培养皿，在35℃ 3%CO2培养箱中温育15~24min。
4. 将磷酸钙-DNA溶液逐滴加入培养皿的细胞中，同时晃动培养皿，在35℃ 3%CO2培养箱中温育15~24min。
5. 用5 ml PBS洗细胞两次，加入10 ml 完全培养液。对于稳定转化，在35~37℃ 5%CO2培养箱中培养过夜。对于短暂表达，培养细胞48~72 h。
6. 在开始选择稳定的转化细抱前按1：10至1：30分传细胞。于35~37℃培养箱中培养过夜。
7. 将培养液换成选择培养液，或在适当的选择条件下培养细胞进行选择稳定的转化子。
来源：丁香实验
