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简介
来源:丁香实验
操作方法
1. 在转染前一天将细胞分入10 cm 组织培养平板中。当被转染的细胞是贴壁细胞,倍增时间为18~24 h时,一般按1:15从长满的培养皿中分细胞效果较好,转染的当天,细胞应在培养皿中很好地分散分布。在加入沉淀前2~4 h,用9 ml 完全培养液培养细胞。 2. 将要转染的DNA用乙醇沉淀,空气中晾干沉淀。将DNA沉淀重悬于450 μl 无菌水中,加50 μl 2.5 mol/l C
高效转染法1. 转染前一天接种呈指数生长的细胞,密度为5×105/10 cm 平板。加10 ml 完全培养液,在开始转染时细胞数应<106/平板,以留足够供细胞扩增至少2倍的表面积。 2. 用TE缓冲液稀释质粒DNA至1 μg/μl ,4 ℃保存。 3. 将最适量的质粒DNA与500 μl 0.25 mol/l CaCl2混合,加入500 μl 2×BBS中,混匀,室温下温育10~20 min。
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