Western Blot 又称为蛋白质印迹，是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的基于抗体抗原之间特异免疫反应的一种定量或定性检测蛋白的实验方法。其基本原理为：聚丙烯酰胺凝胶电泳将不同分子量的蛋白质样品分离，分离后的蛋白被转移到固相支撑物（杂交膜）上，抗体特异性识别目标蛋白，通过酶促反应或者化学发光等方法将目标蛋白可视化，从而对蛋白进行定性或者定量研究。「良好的开始是成功的一半」，尤其对于生物学实验，如果没有高质量 ...

1. 大脑与神经元人类大脑由大约 100 亿个神经元组成，神经元之间通过突触相互连接成复杂的功能网络，因而大脑是人体最复杂的器官。目前，人们对大脑的功能机制的认知还停留在较低的水平，研究大脑的功能也成为科学家的终极目标。2013 年 1 月，人脑工程成为欧盟「未来新兴旗舰技术项目」之一，未来 10 年内将获得 10 亿欧元的科研经费。随后，奥巴马宣布将从 2014 财年的政府预算中拿出 1 亿美元，启动"人脑活动图"项目研究（Brain Activity Map project）。 ...

1. 食品杀菌技术食品杀菌是食品加工过程中的一个非常重要的单元操作，通过杀菌可以钝化食品中的酶并杀死食品中存在的致病菌、腐败菌和产毒菌，以保证食品的安全性，延长食品的保藏期。1.1 食品杀菌技术的分类食品杀菌技术可分为热力杀菌和非热力杀菌两大类。自罐藏技术和巴氏杀菌技术发明以来，热力杀菌技术已经在食品工业中广泛应用，此后又开发了高温短时、超高温、欧姆加热和微波杀菌等热力杀菌技术。这些技术的广泛应用显著提高了食品尤其是 ...

免疫印迹（Western Blotting）的基本原理及应用免疫印迹是一个用于蛋白质分析的常规技术，在电场的作用下将电泳分离的蛋白从凝胶转移至一种固相支持物，然后利用抗原-抗体的特异性反应，从蛋白混合物中检测出目标蛋白，从而定量或定性的确定正常或实验条件下细胞或组织中目标蛋白的表达情况。Western blotting还可用于蛋白-蛋白、蛋白-DNA和蛋白-RNA相互作用的后续分析，作为一种廉价、便捷、可靠的研究工具，将 ...

近几年光遗传学在电生理领域非常火热，在不了解它之前相信很多人会觉得很高端，很难懂。在我们了解之后会发现其实它很简单，只是一种工具的应用：通过基因工程，科学家构建出了携带有特定种类视蛋白基因的病毒载体，用它们感染培育好的实验动物，再通过各种操作将视蛋白特异性表达在某一类神经细胞上。这样一来，一类新的转基因实验动物诞生了，它们脑内将有且仅有这一类神经细胞对光敏感。视蛋白是一种对光敏感的独特蛋白，也就是附着于细胞膜 ...

引言本实验所用基因传递系统（基因枪）原理： 低压基因递送系统（GDS-80 基因枪 U.S. Patent Number: 6,436,709 B1），根据火箭喷嘴原理和空气动力学原理设计，是用于传递生物微粒进入靶细胞的一种新型系统。如图 1 中所示，当左侧出现输入气体压力时（如：氦气），两个腔室之间将形成巨大的压力差，一旦该气体穿过装载样品的咽喉处，GDS-80 中的气体输出将为生物粒子提供足够的动能量，使它们加速到接近超音速的速度（约 300m/s）。在加速过程中 ...

基因枪的历史可以追溯到 1987 年。第一代基因枪是台式基因枪，其中火药型台式基因枪是基因枪中最原始的类型。最早的基因枪是由美国康奈尔大学 Sanford 于 1987 年与该校工程技术专家 Wolf 及 Kallen 合作研究出的一种基因转移的新方法。该方法一经发明便在学界崭露头角，Klein 等人于 1987 年最早应用基因枪进行洋葱表皮细胞的转化，并获得了成功。基因枪自 1987 年诞生以来得到迅速发展。美国康乃尔大学自 1988 年先后申报了三个关于基因枪技术的专 ...

Ä 爱纯派自推出以来得到了很多老师的厚爱。只要有任何关于生物分子分离纯化的问题，发送邮件到我们的专属邮箱 akta.club@ge.com，就会有专家在 48 小时之内为您答疑解惑。鸿雁频传，最近一段时间老师们关于装柱的问题比较多，在这篇文章中，我们将介绍一些实验室装柱的注意要点，以飨读者：一、实验室空柱的选择空柱的材质有塑料，玻璃及金属，材质不同，空柱能够承受的最大压力和应用范围也不同。GE 提供的空柱为玻璃材质，适合多种生物大分子 ...

实验原理TP53 是重要的抑癌基因。在多种肿瘤中都能发现 TP53 基因突变及功能丧失。我们将针对 TP53 基因设计的靶点构建到 pCas9/gRNA1 载体，转染 293T 细胞，构建了 TP53 基因敲除 293T 细胞系。1、本实验基因敲除原理：pCas9/gRNA1 载体表达 gRNA 和 Cas9 蛋白。将靶点序列克隆到 pCas9/gRNA1 载体上，gRNA 将诱导 Cas9 蛋白对靶点 DNA 进行切割，造成 DNA 断裂。细胞通过邻端连接 ( nonhomologous end-joining) 修复重新连接 DNA， ...

蛋白质印迹法（免疫印迹试验）即 Western Blot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。蛋白质印迹法（Western Blot）是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物 NC 膜或 PVDF 膜上，然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检 ...

作者：段涛大夫 在最近的一次会议期间，听到几位专家聊天，说现在很多医院的政策是要逐步引进“千人”（千人计划），或者是“青千”（青年千人计划）来做临床科室的科主任。这基本上代表了不少大学附属医院的想法和做法，理由是大学附属医院需要学术型的学科带头人。学术型医院对临床科主任的要求一个理想的临床科主任的要求是医疗、教学、科研、管理样样精通，基本上是按照既要、又要、还要、还TMD要的标准来的。按照某些临床科主任的说法，这种要求有些变 ...

参考区间是目前国际通用的规范术语，通常又被称为“参考范围”、“正常范围”、“正常值”等。在临床实际中，临床检验已成为疾病诊断、预后判断、疗效评价及健康监测的重要手段，检验项目的参考区间则是疾病诊断和健康评估最主要的依据。在临床检验项目中，往往会因种族、性别、年龄、生长发育等因素的差异而导致参考区间的不同，同时参考区间还会受人群所在地域、经济水平、生活习惯、饮食结构等诸多因素的影响。参考区间的准确性、适用性直接影响着疾病的 ...

凡符合卫生部、人事部印发的《预防医学、全科医学、药学、护理、其他卫生技术等专业技术资格考试暂行规定》(卫人发164号)中报名条件的人员，均可报名参加相应级别的考试。临床医学检验专业： 报名参加临床医学检验技士/技师/主管技师资格考试的人员，要遵守中华人民共和国的宪法和法律，具备良好的医德医风和敬业精神，同时具备下列相应条件： (一) 参加临床医学检验技士资格考试取得临床医学检验专业中专或专科学历，从事本专业技术工作满1年。 (二)参加 ...

案例：通过 RNA 测序分析帕金森病中白血球的长链非编码 RNA 及选择性剪接的调控背景：人类寿命的延长伴随着神经退行性疾病的发病几率的增加，因而价格不贵的血液诊断的发展迫在眉睫。通过 RNA-seq 分析血液细胞的转录本是发现新的生物标志物的非常高效的途径。目的：利用 Illumina 测序平台对帕金森病人白血球中 lncRNAs 进行分析，探讨其对 mRNA 选择性剪接的调控机制。结果：通过对帕金森病人的 RNA-seq 结果分析发现，在白血球中有 6000 个以上 ln ...

案例：应用全基因组测序和 RNA 测序来描绘常见的变异型免疫缺陷综合症（CVIDs）的基因图谱背景：常见的变异型免疫缺陷综合症（CVIDs）是机体免疫应答反应中不能产生抗体的最主要原因。CVIDs 变异度很高，大概 5% 的病人是由基因改变引起的。目的：利用 Illumina HiSeq2500 和 HTSeq 测序平台对 CVIDs 进行全基因组及转录水平的研究，揭示并绘制 CVIDs 的信号调控图谱。结果：通过对 CVIDs 基因组和转录组进行测序和综合分析发现， TNFR ...

案例：以结肠癌，卵巢癌，特发性肺纤维化及正常的人组织为例探讨 circular RNAs 的富集与增殖的相关性背景：最新研究表明，circular RNAs 大量存在，是构成生物体 RNA 网络的一部分，而且研究者们推测 circular RNAs 与 miRNAs 一样具有生物学功能。目的：利用 Illumina 测序平台对细胞增殖速度不同的样品（正常组织和细胞，不同肿瘤组织和细胞，非肿瘤疾病组织和细胞）的 circular RNAs 进行分析，探究 circular RNAs 的富集与 ...

六、MTT 结果分析关于如何计算 IC501、改良寇式法：lgIC50=Xm-I(P-(3-Pm-Pn)/4)Xm:lg 最大剂量I:lg(最大剂量/相临剂量)P: 阳性反应率之和Pm: 最大阳性反应率Pn: 最小阳性反应率举个例子：各药物浓度作用于某肿瘤细胞后所得 MTT 值如下公式中的最大最小阳性反应率就是最大最小抑制率抑制率=1-加药组 OD 值/对照组 OD 值，如对于 100ug/ml 的药物，其抑制率=1-0.080/0.614=0.869，各组抑制率如下：代入计算公式：Pm=0 ...

五、MTT 法实验步骤1. 胰酶消化对数期细胞，终止后离心收集，制成细胞悬液，细胞计数调整其浓度至 5~10×104/ml。细胞详细计数方法请参照易生物实验技术中的相关文章。对于初学者而言，要使细胞达到 5~10×104/ml 往往不知从何处着手，我在这里向大家提供一个简单的方法以初步确定细胞数量。以一般细胞培养常用的 25 cm2 为例，1) 细胞密度在长到约 80%~90%（下图所示为 80%~90% 密度时细胞的大致状态），消化离心收集后，将上清去掉，加入 3 ml 培养基使其 ...

四、实验所需材料1．MTT 溶液的配制通常 MTT 配成的终浓度为 5 mg/ml, 须用 PBS 或生理盐水做溶剂。市面上一般 MTT 的包装为 100 mg,250 mg 或 1 g1.1 对于 100 mg 这样的小包装，厂家都是将 MTT 放入小管中的，个人建议不要再用天平称量分装，而应该一次性将其全配制成溶液，如 100 mg 用 20 ml PBS 来溶解。具休做法：预先在 50 ml 离心管（没有的话，可用培养瓶替代）加入 20 ml PBS，从中先吸取 500-1000ul PBS 装入含 MTT 的小管中，吹打若干次后将其移入 50 ml 离心管，然后再混匀。可以重复 ...

一、MTT 是什么MTT 是一种粉末状化学试剂，全称为 3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide，汉语化学名为 3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。是一种黄颜色的染料。二、MTT 法用来做什么简单地说：是一种检测细胞存活和生长的方法。MTT 主要有两个用途1．药物（也包括其他处理方式如放射线照射）对体外培养的细胞毒性的测定；2．细胞增殖 ...