MTT 的操作方法（四）
丁香园
MTT 结果分析
关于如何计算 IC50
1、改良寇式法：lgIC50=Xm-I(P-(3-Pm-Pn)/4)
Xm:lg 最大剂量
I:lg(最大剂量/相临剂量)
P: 阳性反应率之和
Pm: 最大阳性反应率
Pn: 最小阳性反应率
举个例子：各药物浓度作用于某肿瘤细胞后所得 MTT 值如下
公式中的最大最小阳性反应率就是最大最小抑制率
抑制率=1-加药组 OD 值/对照组 OD 值，如对于 100ug/ml 的药物，其抑制率=1-0.080/0.614=0.869，各组抑制率如下：
代入计算公式：
Pm=0.869
Pn=0.135
P=0.869+0.849+0.616+0.391+0.282+0.135=3.142
Xm=lg100=2
lgI=lg100/50=0.301
lgIC50=2-0.30undefined(3.142-(3-0.869-0.135)/4)=1.655
IC50=45.186
该药物的IC50值为 45.186ug/ml
最近做一个药物抗呼吸道合胞病毒的药效学试验，看大多数文献里，病毒滴定中的TCID50、药物毒性试验中的半数中毒浓度（TC50）最大无毒浓度（TC0）以及药物半数有效浓度（EC50）大多数都用的Reed-Meuench法计算，但文献中对具体的计算方法都没有描述，搜索了园子里面的一些相关的帖子还是一头雾水，不知道是真正懂的人不太多还是还是我没看明白。现在急需搞清这些方法，恳请园内高手赐教！
TCID50=log（CPE高于50% 最高稀释对度）+距离比例×log稀释度间距
计算累积感染百分率（阳性孔是从下往上累积，阴性孔是从上往下累积，计算累积的阳性孔的百分比）
距离比例=（高于50% 的百分数-50）/（高于50% 的百分数-低于50% 的百分数）
举个例子：用上面的累积法得到半数组织感染量在 10-7～10-8之间，距离比例按reed-muench法算出=0.5，那么按照上面的公式TCID50=7+0.5=7.5，病毒的滴度为10-7.5。不知道我这样理解是否正确？算出TCID50后，那么100TCID50如何确定？
药物毒性试验中，药物的剂量2倍递次稀释，假设我得到的数据如下：
剂量mg/ml－－－CPE百分比
200－－－－－－－100％
100－－－－－－－80％
50－－－－－－－45％
25－－－－－－－10％
12.5－－－－－－－0
可以看出TC50为50～100 mg/ml之间的浓度，此时如何套用reed-muench法计算TC50？没有找到现成的公式，只好照葫芦画瓢将剂量数值改成10n。
200=102.3－－－－－－100％
100=102.0－－－－－－80％
50=101.7－－－－－－45％
25=101.4－－－－－－10％
12.5=101.1－－－－－－0
由于n是正数，与病毒滴定时绝对值变化方向相反，用reed-muench法时就得倒过来计算，此时：
距离比例=（50-低于50% 的百分数）/（高于50% 的百分数-低于50% 的百分数）
TC50=Antilog[Log(CPE低于50% 药物浓度)+距离比例×log稀释度间距]
按此法计算上面例子：TC50=Antilog(1.7+0.14×0.3)=55.21
不知道我这种算法是否可行，如果错了请大家原谅，小学数学一直不太好
还有TC0是如何得到的，上面的例子中是不是可以认为TC0>12.5 mg/ml?
TCID50=log（CPE高于50% 最高稀释对度）+距离比例×log稀释度间距
计算累积感染百分率（阳性孔是从下往上累积，阴性孔是从上往下累积，计算累积的阳性孔的百分比）
距离比例=（高于50% 的百分数-50）/（高于50% 的百分数-低于50% 的百分数）
举个例子：用上面的累积法得到半数组织感染量在10-7～10-8之间，距离比例按reed-muench法算出=0.5，那么按照上面的公式TCID50=7+0.5=7.5，病毒的滴度为10-7.5。不知道我这样理解是否正确？
完全正确！
算出TCID50后，那么100TCID50如何确定？
将算出来的数值除以100便得到 100TCID50，也是配100个TCID50所需要稀释的倍数
药物毒性试验中，药物的剂量2倍递次稀释，假设我得到的数据如下：
剂量mg/ml－－－CPE百分比
200－－－－－－－100％
100－－－－－－－80％
50－－－－－－－45％
25－－－－－－－10％
12.5－－－－－－－0
可以看出TC50为50～100 mg/ml之间的浓度，此时如何套用reed-muench法计算TC50？没有找到现成的公式，只好照葫芦画瓢将剂量数值改成10n。
200=102.3－－－－－－100％
100=102.0－－－－－－80％
50=101.7－－－－－－45％
25=101.4－－－－－－10％
12.5=101.1－－－－－－0
由于n是正数，与病毒滴定时绝对值变化方向相反，用reed-muench法时就得倒过来计算。
不大明白，您这是怎么换算的，或许您只是做个简单的假设，这里n其实是负数，也就是倍比稀释，稀释度间距为－0.3。
此时：
距离比例=（50-低于50% 的百分数）/（高于50% 的百分数-低于50% 的百分数）
TC50=Antilog[Log(CPE低于50% 药物浓度)+距离比例×log稀释度间距]
按此法计算上面例子：TC50=Antilog(1.7+0.14×0.3)=55.21
不知道我这种算法是否可行，如果错了请大家原谅，小学数学一直不太好
到这一步还是没有问题的
还有TC0是如何得到的，上面的例子中是不是可以认为TC0>12.5 mg/ml?
TC0 我就不大理解了，我做的是病毒中和抗体实验，需要注意的是，在表示滴定的病毒的结果时一定要写出用了多少病毒，比如，滴定时用的是 100 微升的病毒，那么显示结果时要写成 TCID50=4.3350log10/100 微升（这里的数值 4.3350 只是举例）
再次请教 yvette，在做药物对病毒抑制实验的时候，50％ 的抑制浓度或者药物半数有效浓度（EC50）计算的时候与上面病毒滴定或药物毒性有什么区别吗？
看一篇文献上的例子：
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－累积－－－－－
剂量－－每孔 CPE 程度－－平均 CPE－－CPE 抑制程度－－CPE 抑制－CPE－抑制率 (%)
10-0.3－－1112－－－－－1.25－－－－2.75－－－－8.75－－1.25－－－87.5
10-0.6－－1122－－－－－1.50－－－－2.50－－－－6.00－－2.75－－－68.57
10-0.9－－1223－－－－－2.00－－－－2.00－－－－3.50－－4.75－－－42.42
10-1.2－－3334－－－－－3.25－－－－0.75－－－－1.50－－8.00－－－15.79
10-1.5－－3344－－－－－3.50－－－－0.50－－－－0.75－－11.50－－－6.12
10-1.8－－3444－－－－－3.75－－－－0.25－－－－0.25－－15.25－－－1.61
从上面这个例子可以看出 CPE 是从上往下累积，而 CPE 抑制从下向上累积（这里是病变分数累积，有些好像是病变孔数累积）。在这里的算法是不是与前面的有所不同，计算公式上有什么变化吗？
这种算法我倒是没有看到过，不过看起来也有道理，一般是每个稀释度做 4 个复孔（如果要更准确一点，做 8 个复孔，不过工作量太大），然后看出现 CPE 的孔数（我做流感的时候，因为观察 CPE 不是太客观，因为有时候细胞状态不好时。
虽然没有病毒增殖，但是从显微镜下看细胞也变圆、收缩，看起来像是 CPE 的症状，所以我一般是在第三天时每孔取 50 微升加鸡红细胞做血凝试验，如果有血凝，那么就表示有病毒增殖，就算是有 CPE），CPE 也有程度的不同，这儿他好像是将 CPE 分为 4 个等级，这可能跟不同的病毒有关，有的病毒引起的 CPE 只有“有”和“无”之分。
这儿也是每个稀释度做了 4 个复孔，记录结果时，观察每个孔的 CPE 程度，算出每个稀释度的平均 CPE，因为完全的 CPE 为4，所以每个稀释度 CPE 被抑制的程度就是用 4 减去该稀释度的平均 CPE，那么上表中，倒数第三列是，CPE 被抑制程度的累积。
相当于做病毒滴定时的阳性孔累计数，是从下向上累积；上表中倒数第二列为平均 CPE 的累积，是从上向下累积，那么每个稀释度 CPE 被抑制的比率就=CPE 被抑制程度/(CPE 被抑制程度+平均 CPE),
算法应该是一样的，从表上也可看出，50％ 的抑制浓度应该在10-0.6 到10-0.9 之间。
距离比例=(68.57-50)/(68.57-42.42)=0.7101
50％ 的抑制浓度的对数＝0.6＋0.7101X0.3=0.8130
50％ 的抑制浓度=1：6.501
请教：重组腺病毒载体（非复制型的）在感染的目的细胞中（体内和体外）可以持续表达多长时间？
如果用 MOI=100 的病毒感染细胞，与 100TCID50 感染细胞是一样的么？
不好意思，新手上路，还请上面的各位大虾多多指教。不过有一点搞不清楚，你们为什么不用 spass 软件算了，这样用 Reed-Meuench 法人工算头都大了，还可能算错。用软件只用输入数据就够了。
我算了一下，你的 TCID50 应该是 65.78668，还可以同时得到你的药物毒性曲线。依据你这一次的数据 TC0 应该是个负数。
