MTT 的操作方法（二）

实验所需材料

1．MTT 溶液的配制通常 MTT 配成的终浓度为 5 mg/ml, 须用 PBS 或生理盐水做溶剂

市面上一般 MTT 的包装为 100 mg,250 mg 或 1 g

1.1 对于 100 mg 这样的小包装，厂家都是将 MTT 放入小管中的，个人建议不要再用天平称量分装，而应该一次性将其全配制成溶液，如 100 mg 用 20 ml PBS 来溶解。具休做法：预先在 50 ml 离心管（没有的话，可用培养瓶替代）加入 20 ml PBS，从中先吸取 500-1000ul PBS 装入含 MTT 的小管中，吹打若干次后将其移入 50 ml 离心管，然后再混匀。可以重复几次，以使小管中的 MTT 不残留于管内。将 MTT 完全混匀后，用 0.22μm 滤膜过滤以除去溶液里的细菌，分装避光 (避光袋或是黑纸、锡箔纸包住) 可长期保存于-20 度。按细胞培养板每孔需加 10ul 计算，一般每 96 孔板约需 1 ml，所以分装时可考虑每管分装 1 ml。

1.2 对于大包装，可按上述方法称取一部分溶解，也有人将粉剂分装在 EP 管里，用的时候现配，直接往培养板中加。

注意事项：

(1) 在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。

(2) 配成的 MTT 需要无菌，MTT 对菌很敏感

(3)MTT 一般最好现用现配，过滤后 4 度避光保存两周内（个人曾做过 4 度避光保存 4 周的 MTT 溶液，效果仍然不错）有效，或配制成 5 mg/ml 保存在-20 度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。当 MTT 变为灰绿色时就绝对不能再用。

(4)MTT 有致癌性，用的时候小心, 有条件最好带那种透明的簿膜手套.

2．MTT 甲瓒溶解液

2.1 二甲基亚砜 DMSO，可以直接溶解，无需配制，使用方便，溶解速度快，但对人体毒性较大，且需去除原培养液，在去除培养液的过程中，可能会把结晶去掉，导致结果不稳定。

2.2 三联溶解液：SDS10 g，异丁醇 5 ml，10M HCl 0.1 ml 用双蒸水溶解配成 100 ml 溶液（文献方法：周建军等，评价抗癌物质活性的改良 MTT 方法，中国医药工业杂志，1993，24（10）：455-457），该溶解液不需去除原培养基，但溶解较慢。（个人觉得其溶解的能力不如 DMSO 强）

该溶解液因含有 SDS，在低温保存的时候易产生结晶，因此在用之前必须提前几小时拿至室温，将 SDS 结晶全部溶解后再使用。