对200g SD大鼠背部做2cm×2cm创面，深达肌层，肌层伤口厚度约0.3cm。充分止血后，在创面涂粪液约1mL（粪液的制备：大鼠新鲜粪便10g，加生理盐水5mL，充分混均匀，离心机离心，取其上清液，每天现配现用）48h后观察创面见伤口有黄脓性分泌物，有粪臭味者为造模成功。后续采用负压治疗时，创面用医用泡沫敷料覆盖，每天2h，-125mmHg持续负压，连续5天。（负压治疗进行5天），分析创面各时间点愈合情况。最后采用多普勒超声扫描创面，记录各创面血流量！

本周学术君继续带来 CNS 最新进展，助力大家勇攀科研高峰！1.Proc Biol Sci：限时禁食或影响生育能力限时禁食作为一种饮食模式，深受减肥人士的喜爱。2023 年 4 月 11 日，东英吉利大学生物科学学院Alexei A Maklakov教授团队在Proceedings Of The Royal Society B-biological Sciences杂志发表研究论文Fasting increases investment in soma upon refeeding at the cost of gamete quality in zebrafish。该研究发现限时禁食对雄性和雌性斑马鱼的繁殖有不同的影响，当斑马鱼恢复正常的进食时间表，雌性以卵的质量为代价，增加了它们生产的后代的数量，雄性精子的质量亦随之下降，导致后代的质量下降。该研究结果提示减肥健身人士应考虑禁食对卵子和精子生产的影响。图 1：来源Proceedings Of The Royal Society B-biological Sciences2.Nature：少吃，能延长寿命 10~20%如何保持健康、延

根据世卫组织统计，空气污染是全球第五大健康风险因素，仅仅次于高血压、吸烟、糖尿病和肥胖。如果长期暴露于空气污染，可能造成呼吸道感染、慢性阻塞性肺病、中风、心脏病和肺癌等疾病。在空气污染物当中，PM2.5 悬浮粒子体积细小，是最影响健康的空气污染物之一，可通过呼吸系统进入血液，导致哮喘、肺癌和心脏病等。近日，有新研究发现空气污染中的 PM2.5 不仅会增加痴呆风险，还会引发细胞炎症，诱发肺癌。BMJ：长期吸入 PM2.5 或增加罹患痴呆症的风险目前，全球有超过 5700 万人患有痴呆症，预计到 2050 年，这一数字将增加到 1.53 亿。研究发现，40% 的患病病例与潜在可改变的风险因素有关，如暴露在空气污染物中。2023 年 4 月 5 日，美国哈佛大学公共卫生学院研究学者发现，长期接触细颗粒空气污染物（如 PM2.5）可能会增加痴呆风险。该项研究以题为Ambient air pollution and clinical dementia: systematic review and meta-analysis发表在顶级医学期刊《英国医学杂志》（BMJ）上 [1]。图 1 文献截图（

近些年来，由于社交需要和生活压力增大，我国酒精消费人群日益增多。多项研究曾揭示饮酒对人体的危害，2018 年《柳叶刀》的研究显示，酒精是全球 15-49 岁群体患病和早逝的主要风险因素，全球有近十分之一的人口死亡因饮酒所致，因此对健康危害最小的饮酒量就是滴酒不沾[1]。但现实中，有时迫于社交和生活的压力，喝酒在所难免，那有什么办法能治疗或削弱酒精对人体的不良影响吗？众所周知，既往多项研究证明，益生菌对酒精性肝损伤具有保护作用。其一，它可以通过调节肠道菌群来减轻对肝脏的损伤；另一方面，可以减少内毒素引起的炎症反应，在肝脏疾病中发挥重要保护效果。近日，一项新研究不仅再次证实益生菌对肝脏的保护效果，还发现益生菌对饮酒后的损伤具有多项保护效果。2023 年 4 月 11 日，国内的中国科学院动物研究所、河北医科大学和河南新乡医学院等研究人员联合在Microbiology Spectrum发表题为Oral Probiotic Expressing Human Ethanol Dehydrogenase Attenuates Damage Caused by Acute Alcohol Consu

导读节食是最常用的减肥方法，但是绝大多数人最初可能减肥成功，但如果未能长期坚持节食，则最终使得体重反弹。下丘脑弓状核（Arcuate nucleus of the hypothalamus, ARC）被认为是驱动体重反弹的神经回路的重要组成部分。事实上，ARC 神经元整合了能量可用性的中枢和循环信号。此外，通过遗传操作改变 ARC 会导致严重的体重改变，进一步强调了 ARC 在长期控制体重中的关键作用。然而，人们对减肥诱导的 ARC 神经回路的改变与调节过程之间的关系仍然知之甚少。近日，来自马克斯-普朗克研究所的研究团队在Cell Metabolism发表了题为A synaptic amplifier of hunger for regaining body weight in the hypothalamus的文章，研究人员关注了节食后大脑的长期变化。他们发现可以控制饥饿感的一组神经元——AgRP 神经元，在节食后会接收到更强的信号，使得小鼠在节食后吃得更多，体重增长得更快。从长远来看，这些发现可能有助于开发药物来防止这种放大，并有助于在节食后保持体重减轻。图片来源：Cell Met

转眼间，夏天的气息已经遍布大地的每一个角落。新时节、新气象，科研人开启探索新征程。本周学术君继续带来 CNS 最新进展，助力大家勇攀科研高峰！1.Nature：NKp46 识别内质网应激细胞上的外钙网蛋白阻断 NK 细胞受体 NKp46 能够抑制 NK 细胞对许多癌症靶点的杀伤作用。2023 年 4 月 5 日，美国哈佛大学医学院Judy Lieberman教授团队在Nature杂志发表研究论文The NK cell receptor NKp46 recognizes ecto-calreticulin on ER-stressed cells。该研究发现 NKp46 能够识别外化钙网蛋白 (ecto-CRT)，在内质网应激时从内质网 (ER) 转移到细胞膜。其中，ecto-CRT 对 NKp46 的识别能够有效地控制小鼠 B16 黑色素瘤和肺癌，并增强肿瘤浸润 NK 细胞的细胞因子分泌。图 1：来源Nature2.Nature：PM2.5 促进肺癌发生的机制PM 小于 2.5 的细颗粒可以进入肺部深处，引起多种疾病。2023 年 4 月 5 日，英国伦敦大学学院和弗朗西斯·克里克研究

急性肺损伤是ARDS的早期阶段，急性肺损伤(ALI)是指由心源性以外的各种肺内外致病因素导致的急性、进行性缺氧性呼吸衰竭。小鼠肺损伤建模，气管暴露后，用1ml注射器将脂多糖LPS（3mg/kg）滴加入气管内，并竖立起老鼠，使之分布均匀保证双肺分布均匀。

Strep-tag®：适用范围广 纯化选择多由于His-tag 系统使用 Ni 离子，所以在纯化金属蛋白（多数为酶）时，可能会受到金属间交互作用的干扰，而使用 Strep-tag®则不会出现此问题，因 Strep-Tactin®XT 与 Strep-tag®的特异性结合不受金属离子影响。且因其温和的纯化流程，所以还能用于纯化大型蛋白、多亚基的蛋白复合体或是跨膜蛋白，并且保持蛋白功能。以 Strep-tag®系统纯化出不同的蛋白，下图为例：图 1依据研究项目的不同，各实验室使用不同的表达系统，最常用的有大肠杆菌、哺乳动物细胞、酵母、昆虫细胞或是植物细胞等。但若使用哺乳动物细胞来表达目的蛋白，His-tag 则不适宜，因为系统中的组氨酸会干扰其纯化表现，其他的生产商也不建议这样的使用方式 。而 Strep-tag®系统则与这些表达系统都能互相搭配，见下图实验数据：图 2全方位的蛋白质研究平台：从纯化到固定分析除了用来生产高纯度的蛋白，Strep-Tactin®XT 与 Twin-Strep-tag®间的高亲和力更能利用来稳定的固定目标蛋白，以进行蛋白质检测，例如 SPR 分析。以往为了增进

STTT|雷公藤红素抗癌靶标新发现雷公藤红素，又名南蛇藤素，是从雷神藤中分离出的最具前途的天然药用产物之一，对多种肿瘤类型均有较显著的抑制作用。然而，雷公藤红素具有较严重的副作用，所以它的临床应用受到严格限制，同时，由于其发挥抗肿瘤活性的分子靶标和作用机制不够清晰，缺乏雷公藤红素与靶标的复合物晶体结构，使得基于其化学结构改造开发高效低毒的雷公藤红素衍生物缺乏明确的指导方向。2023 年 2 月 3 日，中科院上海药物所张豪与上海交通大学徐颖、张翱为共同通讯作者在《Signal Transduction and Targeted Therapy》（IF=38.104）发表了题为：「Celastrol suppresses colorectal cancer via covalent targeting peroxiredoxin 1」 的研究论文，在这里，作者开发了一种新的靶标富集排序工具—OTTER，并利用这个新工具结合生物化学、生物物理等技术手段，发现过氧化物还原酶 1（peroxiredoxin 1, PRDX1）是结直肠癌中雷公藤红素的靶蛋白，并首次解析了雷公藤红素与 PRDX1

《Science》中科大团队重磅发现：肿瘤免疫检查点疗法潜在新靶点肿瘤诱导的免疫抑制是癌症逃避免疫监视和免疫攻击的主要原因。目前，免疫检查点疗法（ICT）在一些癌症的临床治疗中有很好的效果，其通过靶向细胞毒性T淋巴细胞相关抗原 4(CTLA-4)和程序性细胞死亡蛋白 1(PD-1)来逆转 T 细胞的免疫抑制。但是仍有大约 70% 的癌症患者对 ICT 不敏感，因此，寻找有效的 ICT 靶点是非常必要的。最新的研究表明，中枢神经系统可以调节癌症的发展和免疫系统的活动，其中主要途径是通过神经内分泌系统。垂体是神经内分泌系统的「指挥中心」，其一些下游激素或效应物在癌症患者中升高，提示神经内分泌系统和垂体单位可能参与调控肿瘤免疫，然而其中的机制仍不清楚。2022 年 8 月 4 日，中国科学技术大学周荣斌教授作为第一通讯作者在《Science》（IF=63.714）上发表了题为《Pituitary hormone α-MSH promotes tumor-induced myelopoiesis and immunosuppression》的研究论文，深入探究了神经内分泌系统促进肿瘤相关的骨髓

在实验过程中我们可能会碰到各种各样的细胞，不同的细胞培养和感染可能会有所不同，像很多细胞系的培养和感染可能会比较容易，但也有细胞比较「娇嫩」，普通的 DNA 质粒根本就转不进去，即使是病毒载体感染，也有不少难题：有些细胞的慢病毒感染能力偏弱，需要多次重复感染；有些细胞本身十分敏感且脆弱，慢病毒感染对细胞的状态影响非常大；有些细胞是悬浮细胞，进一步增大了病毒感染的难度。那么针对不同的细胞我们都有哪些培养和感染注意事项呢？一、贴壁细胞贴壁细胞（adherent cells），这类细胞的生长必须有可以贴附的支持物表面，细胞依靠自身分泌的或培养基中提供的贴附因子才能在该表面上生长，繁殖。正常贴壁细胞在培养几天后，会逐渐贴满整个瓶底或者皿底，有的呈纤维状，有的呈多边形。贴壁细胞相对于悬浮细胞来说，更容易感染，腺病毒和慢病毒均可感染贴壁细胞，感染效率也比较高。贴壁细胞感染步骤可参考汉恒生物慢病毒/腺病毒操作手册。图 1：慢病毒感染不同贴壁细胞二、原代细胞原代细胞（primary culture cell）是指从机体取出后立即培养的细胞。一般把培养的第 1 代细胞与传 10 代以内的细胞统称为原代细

在动物实验中，我们经常会通过过表达/敲低某个基因，观察对模型的影响来研究该基因的功能。病毒载体作为高效、安全的基因递送载体，在动物体内基因表达调控研究中得到广泛应用。组织特异性启动子又称为器官特异性启动子，在这类启动子的作用下，基因的表达往往只限于某些特定的组织或器官，同时表现出发育调节等特性，从而克服了组成型启动子启动的外源基因在受体植物中非特异、持续、高效表达所造成的浪费，增加转基因的效果，因此人们对特异性启动子的研究和应用中备受青睐。慢病毒（LV）、腺病毒（AD）、腺相关病毒（AAV）都可以与特异性启动子结合使用，实现组织特异性的基因表达调控。其中 AAV 应用尤为广泛，将 AAV 与组织特异性启动子结合，配合适当的注射方式，在组织特异性启动子的调控下，可以实现靶基因在特定细胞或组织器官中的长期表达调控，使其在疾病机制的研究中应用更为广泛。伴随科学发展的不断进步，越来越多的组织（细胞）特异性启动子被开发出来，使科研实践中不同需求得到满足，各种巧妙的实验设计的已实现。目前组织特异性启动子目前已被广泛应用于神经、心血管、肝脏、肾脏、脂肪、肌肉、骨骼、眼科、胰腺等多个研究领域,下表列举

荧光蛋白和荧光素酶是在基因工程中广泛使用的两类报告基因 (reporter gene)，是研究生物分子或细胞活动规律及本质的重要工具。荧光蛋白荧光蛋白能被一定波长的光激发，电子被激发到高能级，随后向低能级跃迁的过程中发出比激发光波长更长的荧光。绿色荧光蛋白（GFP）最初是在水母中发现的，随后各种颜色的荧光蛋白被开发出来。目前荧光蛋白按照颜色分类主要分为绿色系、红色系、蓝色系、青色系、黄色系和橙色系（表 1）。这么多的荧光蛋白，可以根据哪些方面来选择呢？激发峰/发射峰：每种荧光蛋白都有其独特的激发波长和发射波长，需匹配荧光成像系统的检测范围。同时检测多种荧光蛋白时，需避免颜色和光波长的冲突。绿色和红色荧光蛋白较为常用。红色或近红外的荧光蛋白更适用于活体成像。单体性质：荧光蛋白多聚体可能会影响融合蛋白的生物学功能和定位，应尽量选择单体。亮度：荧光蛋白的亮度值由消光系数与量子产率的乘积计算得出。在许多情况下，将荧光蛋白的亮度与 EGFP（设定为 1）进行比较（表 1），应选择足够亮的荧光蛋白便于检测和成像。PK 值：每个荧光蛋白都有其最适 pH 值，此时的荧光强度最高。在细胞内，大多数细胞器

灌胃需要将管道从小鼠的口腔插入到胃肠部位，具体的导管长度，需要通过小鼠的体型来选择。

小鼠麻醉后，按照特定的角度和体位固定在支架上，然后用合适的导管缓缓插入小鼠的气管，然后进行后续操作。

尾静脉注射，小鼠固定后可用 40-45℃ 热水孵育鼠尾 1 分钟左右，使血液流畅。

腿部肌肉注射通常不需要麻醉动物，但对拿取动物的姿势、手法等要求很高，务必留意小鼠或者大鼠会咬伤手指，我们以大鼠为例讲解腿部肌肉注射方法。

肾盂是肾脏的一部分，是圆锥形的囊状物，上连肾实质，下端通输尿管。如果对肾盂局部「快速」注射病毒，可以造成肾盏内压力过高，病毒会逆流而上，从而流入并感染肾脏实质。

通过手术手法将 AAV 病毒稀释液注射进入小鼠乳腺皮下组织。

鞘内注射是一种简便快速、无创式向脊索导入 AAV 的一种方法。